目錄号 | MP4202-5G | 售價 | 89.00元 | ||||||||||||||||||||||||||
規格 | 5g | 運輸溫度 | 冰袋 | ||||||||||||||||||||||||||
其他名稱 | EDC鹽酸鹽;EDAC 鹽酸鹽;WSC 鹽酸鹽;1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽;N-乙基-N′-(3-二甲基氨丙基)碳二亞胺鹽酸鹽; | 保存溫度 | -20℃幹燥保存 | ||||||||||||||||||||||||||
CAS号 | 25952-53-8 | 有效期 | 2年(nián) | ||||||||||||||||||||||||||
應用 | 羧基活化劑 | 訂購數量 |
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産品簡介: EDC HCl 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽 産品關鍵詞 EDC 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺;EDC HCl;sulfo-NHS N-羟基硫代琥珀酰亞胺;Carboxyl activating agent 羧基活化劑;Peptide synthesis 多(duō)肽合成;CAS:25952-53-8;
産品信息
産品描述 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride, EDC HCl)是一(yī)種水(shuǐ)溶性碳二亞胺衍生(shēng)物(wù),用于偶聯半抗原到(dào)蛋白(bái)和多(duō)肽上(shàng)。EDC HCl能(néng)用來修飾NMDA受體,以及肽合成中用作一(yī)種縮合劑。
EDC HCl是一(yī)種零長(cháng)度交聯劑,用來偶聯羧基到(dào)伯胺上(shàng)。這一(yī)交聯劑應用非常廣泛,比如:肽合成中形成酰胺鍵,連接半抗原到(dào)載體蛋白(bái)上(shàng)形成免疫原,通(tōng)過5'磷酸基團标記核酸,制備生(shēng)物(wù)分子具胺反應指向的N-羟基琥珀酰亞胺酯(NHS Ester)。 EDC首先與羧基反應産生(shēng)一(yī)個(gè)具胺反應性的O-酰基異脲中間體,如果這一(yī)中間體未碰到(dào)胺,會(huì)水(shuǐ)解再生(shēng)成羧基。當體系内含N-羟基硫代琥珀酰亞胺(sulfo-NHS),EDC能(néng)将羧基轉化成具胺反應性的N-羟基硫代琥珀酰亞胺酯(sulfo-NHS ester)。這一(yī)步隻需将EDC與含羧基分子混合,并加入sulfo-NHS即可完成。
産品特性 1) CAS NO:25952-53-8 2) 英文同義名:EDC Hydrochloride; EDAC HCl; EDAC Hydrochloride; WSC HCl; N-(3-Dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimide hydrochloride; 3-(ethyliminomethylideneamino)-N,N- dimethylpropan-1-amine hydrochloride; 1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride; 3) 中文同義名:EDC鹽酸鹽;EDAC 鹽酸鹽;WSC 鹽酸鹽;1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽;N-乙基-N′-(3-二甲基氨丙基)碳二亞胺鹽酸鹽; 4) 分子式:C8H17N3·HCl 5) 分子量:191.7 g/mol 6) 純度:≥98% 7) 外觀:白(bái)色至灰白(bái)色粉末 8) 溶解性:溶于水(shuǐ) 9) 化學結構式:
保存與運輸方法 保存:-20℃幹燥保存,至少2年(nián)有效。 運輸:冰袋運輸。
注意事(shì)項 為(wèi)了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。
操作步驟【僅做參考】 一(yī)、 用EDC将半抗原偶聯到(dào)載體蛋白(bái)上(shàng) 1.1 所需材料 載體蛋白(bái):2mg 牛血清白(bái)蛋白(bái)(BSA)、卵清白(bái)蛋白(bái)(OVA)或鑰孔血藍蛋白(bái)(KLH) 共轭緩沖液:0.1M MES,pH 4.5~5 EDC:10mg 半抗原:1~2mg 離心脫鹽柱或其他具5~6k截留分子量的凝膠過濾柱
1.2 偶聯步驟 1) 将EDC平衡至室溫; 2) 加入2mg BSA、OVA或KLH到(dào)200μl共轭緩沖液; 3) 在500μl共轭緩沖液中溶解高(gāo)達2mg的肽或半抗原,并将其加入200μl載體蛋白(bái)溶液中。 4) 對于BSA或OVA偶聯,将10mg EDC溶于1ml超純水(shuǐ)中,并且立即加100μl該溶液到(dào)載體蛋白(bái)-多(duō)肽溶液。對于KLH偶聯,将10mg EDC溶于1ml超純水(shuǐ)中,并且立即加50μl該溶液到(dào)載體蛋白(bái)-多(duō)肽溶液。如果出現沉澱,之後減少EDC用量。 5) 室溫反應2h。 6) 使用脫鹽柱純化偶聯物(wù)。如果需将免疫原儲存數日,需過濾除菌,并在4℃或-20℃下(xià)保存于無菌管内。
二、 用EDC和NHS(或Sulfo-NHS)兩步法偶聯蛋白(bái) 【注意】以下(xià)步驟引用自(zì)Grabarek and Gergely,能(néng)夠順序偶聯兩個(gè)蛋白(bái),并且不會(huì)影響第二個(gè)蛋白(bái)的羧基。此步驟需含巯基化合物(wù)淬滅第一(yī)個(gè)反應。 【注意】EDC與Sulfo-NHS的活化反應在pH 4.5~7.2最有效。然而,NHS活化或Sulfo-NHS活化分子與伯胺的反應在pH 7~8最有效。為(wèi)了得到(dào)最佳結果,第一(yī)步反應在pH 5~6的MES緩沖液(或其他非胺非羧酸鹽緩沖液)内進行,之後用磷酸鹽緩沖液(或其他非胺緩沖液)提高(gāo)pH到(dào)7.2~7.5,立即進行與伯胺分子的反應。為(wèi)了淬滅第一(yī)步反應,使用2-ME或通(tōng)過脫鹽柱進行緩沖液交換,可以簡單的除去過量試劑。
2.1 所需材料 活化緩沖液:0.1M MES,0.5M NaCl,pH 6.0 偶聯緩沖液:磷酸鹽(PBS),100mM 磷酸鈉,150mM NaCl,pH 7.2 蛋白(bái)1:制備于活化緩沖液(1mg/ml) 蛋白(bái)2:制備于偶聯緩沖液 NHS或Sulfo-NHS 2-ME 【可選】脫鹽柱或其他凝膠柱 羟胺鹽酸
2.2 偶聯步驟 1) 開(kāi)瓶前将EDC和NHS平衡至室溫。 2) 向1 ml蛋白(bái)1溶液中加入0.4 mg EDC(~2 mM)和0.6 mg NHS或1.1 mg Sulfo-NHS(~5 mM),室溫下(xià)反應15min。 3) 加入1.4 μl 2-ME(終濃度為(wèi)20 mM)以淬滅EDC。 4) 【可選】:使用已經用偶聯緩沖液(PBS)平衡的脫鹽柱将蛋白(bái)質與過量的還(hái)原劑和滅活的交聯劑分開(kāi)。 5) 将蛋白(bái)2以與蛋白(bái)質1等摩爾比加入活化的蛋白(bái)中。室溫反應2h。 6) 為(wèi)了淬滅反應,加入羟胺至終濃度為(wèi)10 mM。此方法水(shuǐ)解蛋白(bái)1上(shàng)未反應的NHS,生(shēng)成異羟肟酸。 7) 使用脫鹽柱除去過量的淬滅劑。
相(xiàng)關産品
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
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