Peroxidase (POD), Grade II，from horseradish

（辣根過氧化物(wù)酶 HRP，Grade II）

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Peroxidase from Horseradish 辣根過氧化物(wù)酶；HRP；過氧化物(wù)酶 POD；抗體偶聯；免疫球蛋白(bái)；CAS：9003-99-0；

辣根過氧化物(wù)酶（Horseradish peroxidase，HRP，EC 1.11.1.7），一(yī)種含四個(gè)二硫鍵的單鏈多(duō)肽，也是一(yī)種由無色的酶蛋白(bái)和棕色的鐵卟啉結合而成的糖蛋白(bái)，含18% 碳水(shuǐ)化合物(wù)。碳水(shuǐ)化合物(wù)的組分包括半乳糖，阿拉伯糖，木(mù)糖，海藻糖，甘露糖，甘露糖胺和半乳糖胺，取決于同工(gōng)酶類型。

HRP能(néng)快速結合過氧化氫（H2O2）産生(shēng)HRP- H2O2複合物(wù)，其可氧化大量的氫供體，反應式為(wèi)：Donor + H2O2→ Oxidized Donor + 2 H2O。過氧化物(wù)酶可氧化各種底物(wù)，包括生(shēng)色底物(wù)、化學發光(guāng)底物(wù)（魯米諾和異魯米諾）和熒光(guāng)底物(wù)（酪胺，高(gāo)香草(cǎo)酸和對羟基苯乙酸）。

辣根過氧化物(wù)酶（HRP）普遍用于标記許多(duō)不同免疫化學實驗用的免疫球蛋白(bái)，包括ELISA，免疫印迹，免疫組化。還(hái)能(néng)通(tōng)過幾種不同方法偶聯到(dào)抗體上(shàng)，有二硫鍵介導的戊二醛交聯，過碘酸氧化法；還(hái)有氨基和巯基直接介導的交聯。HRP是最理想的抗體标記酶，因為(wèi)在三種最受歡迎的标記酶（HRP，β-半乳糖苷酶和堿性磷酸酶AP）中，HRP不僅分子量最小(xiǎo)和最穩定，而且糖基化使HRP産生(shēng)更低(dī)的非特異性結合。

一(yī)、POD（Grade II）的應用

POD（Grade II）在許多(duō)診斷測試的指示反應中用來氧化還(hái)原性染料，比如，血糖、甘油三酯、乳汁内的血糖測定。也是一(yī)種标記酶，用于酶聯免疫實驗（EIA）。

二、POD（Grade II）的特性

1）CAS NO：9003-99-0

2）英文同義名：Peroxidase (POD), from horseradish; Horseradish peroxidase; HRP; Donor:hydrogen-peroxide oxidoreductase;

3）中文同義名：辣根過氧化物(wù)酶；過氧化物(wù)酶，來自(zì)辣根；氫供體-過氧化氫氧化還(hái)原酶；

4）分子量：40kDa

5）等電(diàn)點：7.2

6）速率常數：氫受體【H2O29 x 108 [L x mol-1 x s-1]；methyl peroxide 1.5 x 106 [L x mol-1 x s-1]；ethyl peroxide 3.6 x 106 [L x mol-1 x s-1]】；氫供體【許多(duō)】

7）抑制劑：疊氮鈉，氰化物(wù)，L-胱氨酸，重鉻酸鹽，亞乙基硫脲，羟胺，硫化物(wù)，釩酸鹽，對氨基苯甲酸，Cd2+, Co2+, Cu2+, Fe3+, Mn2+, Ni2+, and Pb2+

8）激活劑：氨、吡啶、咪唑（pH>7.0）能(néng)加速鄰聯茴香胺的過氧化

9）最佳pH：6.0-6.5

10）熱穩定：高(gāo)達40℃

11）特異性：過氧化物(wù)酶特異性識别氫受體，僅H2O2，甲基和乙基過氧化物(wù)有活性。但是，其不能(néng)特異性識别氫供體，許多(duō)酚類、氨基酚類、二胺類、白(bái)細胞染料、抗壞血酸和幾種氨基酸都能(néng)與其反應。

12）外觀：紅(hóng)-棕色凍幹粉

13）溶解性：溶于水(shuǐ)（10mg/ml），透明、紅(hóng)棕色溶液

14）pH (c=10mg/ml)：6.6-7.6

15）活性：≥200 U/mg lyophilizate

16） 純度值：RZ=2.0~3.5。RZ（Reinheitszahl）代表過氧化物(wù)酶純度值，為(wèi)溶于去離子水(shuǐ)中的酶（0.5–1.0 mg/ml）的吸光(guāng)度比值A403/A275。

17）污染物(wù)：ATPase: ≤0.001；Catalase: ≤0.7；Phosphatase, acidic: ≤0.001；Contaminating oxidases: ≤0.00005；

18）穩定性：2-8℃幹燥，2年(nián)

酶的性能(néng)表現：

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