DirectPCR Lysis Reagent (Cell) 細胞直接PCR裂解液

【單瓶試劑，細胞裂解+PCR一(yī)步到(dào)位】

産品關鍵詞：

Viagen Biotech; DirectPCR^® 直接PCR；PCR genotyping 基因分型；Proteinase K 蛋白(bái)酶K；302-C (301-C)；

産品介紹：

Viagen DirectPCR^® DNA Extraction System（DirectPCR^® DNA提取系統）是一(yī)種單管系統，用于從(cóng)小(xiǎo)鼠尾巴，耳片，卵黃囊和培養細胞内快遞制備DNA。Viagen Biotech, Inc科學家開(kāi)發的專利組分（正在申請專利）允許用DirectPCR® DNA Extraction System獲得的DNA提取物(wù)與基因分型用的基因組PCR兼容。生(shēng)物(wù)樣本的粗提物(wù)與許多(duō)分子生(shēng)物(wù)學級的試劑比如PCR都難以兼容，部分原因在于粗提物(wù)内含有抑制劑。DirectPCR®不僅介導生(shēng)物(wù)樣品的快速裂解，而且含有抑制劑，能(néng)夠有效抑制PCR擴增用粗提裂解物(wù)中存在的抑制效應，同時最大程度保持釋放(fàng)出來的基因組DNA的完整性。專利申請中的DirectPCR®操作起來，完全消除任何溶液轉移或開(kāi)管步驟，根本上(shàng)節省了大量時間和精力。

産品特點：

1）省時：更少的動手時間；尾巴裂解液粗提物(wù)即可用于PCR；

2）省錢(qián)：僅需成本的反應流程；

3）安全：無有機(jī)試劑；

4）環保：更少消耗（有機(jī)試劑，管子，槍頭等等）

5）可靠有效：100%成功率保證高(gāo)産量

簡單流程：

1）用DirectPCR®裂解細胞；

2）85℃孵育45min；

3）取1μl裂解液進行PCR基因型研究。

詳細流程：

1）10cm細胞培養闆細胞，使用添加新鮮制備的0.2-0.4mg/ml蛋白(bái)酶K的200-300μl DirectPCR®Lysis Reagent (Cell) 細胞裂解液重懸細胞。蛋白(bái)酶K在DirectPCR®中穩定保存~24h。如果處理少量細胞，會(huì)很難稱量蛋白(bái)酶K粉末，可直接使用Viagen提供的基因組PCR級的蛋白(bái)酶K溶液（Cat#501-PK），使用濃度為(wèi)0.5-1.0mg/ml（每1ml DirectPCR®中加入25-50μl蛋白(bái)酶K溶液）。【注意】：若使用小(xiǎo)量細胞，可用去離子水(shuǐ)稀釋DirectPCR®高(gāo)達10倍，然後使用合适更多(duō)體積的裂解液用于PCR。見(jiàn)表1，DirectPCR®Lysis Reagent (Cell)起始使用條件(jiàn)。

2）置于旋轉雜(zá)交爐中，55℃轉動管子處理5-6h或直到(dào)看(kàn)不見(jiàn)組織團。若有必要，能(néng)過夜裂解樣本，不會(huì)影響效率。完全裂解至關重要。要想獲得更具有重複性的結果，中途搖動一(yī)下(xià)瓶子以更換管子的位置一(yī)次，最好在處理2-3h之後。

3）水(shuǐ)浴鍋内85℃孵育粗提液45min。【可選】于步驟4）前離心10s沉澱毛發。粗提液可置于-20℃保存1年(nián)（或4℃保存1周），不會(huì)降低(dī)效率。

4）每50μl PCR反應體系加入0.5-1.0μl裂解液。推薦PCR用Qiage Hotstar Taq DNA polymerase或Sigma JumpStart Taq DNA polymerase。

表1，DirectPCR®Lysis Reagent (Cell) 起始使用條件(jiàn)。

* Lysis using rotation hybridization oven. 

** Lysis using rocking plate. Wash cells in 96-well plate twice with phosphate buffered saline and add 60 µl DirectPCR Reagent (Cell), which has been 2-fold diluted.  Incubate at 55°C overnight. Place the 96-well plate in the wet chamber and float the chamber on the 85°C water bath for 1.5 hrs.  Pipette up and down several times. Take 1 µl of lysates for PCR.

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下(xià)載：DirectPCR Lysis Reagent (Cell) Protocol Manual

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