Rhodamine Phalloidin羅丹明标記鬼筆環肽

(Cytoskeleton Inc. PHDR1）

産品标簽

Phalloidin 鬼筆環肽；Actin-Stain^TM 488 Phalloidin；F-actin 肌動蛋白(bái)（聚合）；Actin filaments 肌動蛋白(bái)絲；Cytochalasin細胞松弛素；CAS NO.：17466-45-4；

基本描述

鬼筆環肽（Phalloidin），又(yòu)稱鬼筆鵝膏素，是從(cóng)毒蘑菇鬼筆鵝膏（Amanita phalloides）中分離到(dào)的一(yī)種七氨基酸多(duō)肽毒素，以極高(gāo)親和力和特異性結合肌動蛋白(bái)絲F-actin（聚合形式的肌動蛋白(bái)）（Kd=20nM）。鬼筆環肽将肌動蛋白(bái)聚合的臨界濃度降至≤1μg/ml，從(cóng)而用作一(yī)種聚合增強劑。熒光(guāng)探針标記的鬼筆環肽（Fluorescent-conjugated Phalloidins）能(néng)對組織培養細胞、組織切片和無細胞制備物(wù)進行肌動纖維絲染色。經鬼筆環肽标記的肌動纖維絲仍能(néng)維持标記前的許多(duō)功能(néng)特征包括能(néng)夠與肌球蛋白(bái)相(xiàng)互作用。

産品應用

1. [Stain F-actin in fixed cells]; 對固定的組織切片和組織細胞培養物(wù)進行聚合形式肌動蛋白(bái)的熒光(guāng)染色；

2. [Stabilize actin filaments in vitro] 體外穩定肌動蛋白(bái)絲；

3. [Visualize actin filaments in vitro] 體外可視化肌動蛋白(bái)絲；

鬼筆環肽（Phalloidin）用作實驗室研究工(gōng)具的方法得到(dào)良好的闡述和驗證，歸功于其能(néng)抑制微絲去聚合（Microfilament depolymerization）的能(néng)力。由此，經Phalloidin穩定的微絲能(néng)用作底物(wù)來鑒定和歸類逐漸增加的微絲相(xiàng)關蛋白(bái)。另外，羅丹明标記的鬼筆環肽（Rhodamine Phalloidin）能(néng)用來對細胞肌動蛋白(bái)骨架進行染色，以及細胞運動實驗中用作微絲的熒光(guāng)标志(zhì)物(wù)/穩定劑。

産品特征

1. 外觀：粉末凍幹粉；

2. 純度：>99%

3. 分子量：1306

4. 保存：凍幹粉4℃幹燥保存1年(nián)有效；儲存液-20℃避光(guāng)保存半年(nián)有效；

5. 重溶方法：使用前簡單離心使得産品都降至管底，加入500µl 100%甲醇充分溶解後配置成14µM儲存液。建議按照(zhào)10×50µl分裝，-20℃避光(guāng)保存，穩定保存6個(gè)月(yuè)。

6. 生(shēng)物(wù)活性：本品的肌動蛋白(bái)絲穩定活性（Microfilament stabilizing property）相(xiàng)當于或更優于其他商業(yè)化同類型鬼筆環肽産品。用70nM Phalloidin标記的肌動蛋白(bái)絲室溫超過1周穩定保存。

應用實例

Fig 1.  羅丹明鬼筆環肽（Cytoskeleton, PHDR1）染色下(xià)的Swiss 3T3成纖維細胞。A Swiss 3T3 fibroblast stained with rhodamine phalloidin (PHDR1). The phalloidin binds specifically to F-actin and does therefore stain the actin stress fibers in the cell

使用方法【僅作參考】：

1. 免疫熒光(guāng)（Immunofluorescence）

需要材料：1）Rhodamine Phalloidin（PHDR1）；2）蓋玻片爬片生(shēng)長(cháng)達到(dào)半彙合的Swiss 3T3細胞；3）PBS buffer；4）固定劑；5）破膜劑；7）抗熒光(guāng)淬滅封片劑；8）100nM DAPI in PBS；11）載玻片；12）蓋玻片封固液（透明指甲油）；

操作流程：咨詢我司工(gōng)作人員(yuán)或詳見(jiàn)說明書。

2. 制備穩定的熒光(guāng)标記肌動蛋白(bái)絲（Preparation of stabilized fluorescent actin filaments）

體外肌動蛋白(bái)運動試驗（in vitro motility assays），穩定的熒光(guāng)标記肌動蛋白(bái)絲是研究肌球馬達蛋白(bái)非常優秀的底物(wù)材料。Rhodamine phalloidin結合對肌球蛋白(bái)ATPase的肌動蛋白(bái)激活無影響。

需要材料：1）肌動蛋白(bái)Actin protein（#AKL99-A）；2）通(tōng)用肌動蛋白(bái)緩沖液General Actin buffer（#BSA01）；3）10×聚合緩沖液Polymerization buffer（#BSA02）；4）Rhodamine phalloidin（PHDR1）；

操作流程：

 1. 用250ul 添加0.2mMATP和1.0mM DTT的通(tōng)用肌動蛋白(bái)緩沖液來重懸兔肌肉肌動蛋白(bái)（rabbit muscle actin，#AKL99-A），使其濃度為(wèi)1mg/ml。

2. 加入1/10體積的聚合緩沖液來聚合肌動蛋白(bái)，室溫孵育1h。

3. 用含70nM rhodamine phalloidin的聚合緩沖液按照(zhào)1:100的比例稀釋聚合的肌動蛋白(bái)絲。

4. 吸取1ul标記好的肌動蛋白(bái)滴在已滴有一(yī)滴抗熒光(guāng)淬滅劑的載玻片上(shàng)。

5. 取一(yī)幹淨蓋玻片蓋在液滴處，用紙(zhǐ)巾吸掉多(duō)餘液體。

6. 熒光(guāng)顯微鏡觀察熒光(guāng)纖維。肌動蛋白(bái)絲平均長(cháng)度為(wèi)5-40um，在4℃避光(guāng)能(néng)穩定保存1周。

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【說明A】：本品500ul約可做300-350張細胞爬片；

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引用文獻（#PHDR1）：

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