Acti-stain 555 phalloidin橙紅(hóng)色熒光(guāng)标記鬼筆環肽

(Cytoskeleton Inc. PHDH1-A）

産品标簽

Phalloidin 鬼筆環肽；Actin-Stain^TM 555 Phalloidin；F-actin 肌動蛋白(bái)（聚合）；Actin filaments 肌動蛋白(bái)絲；Cytochalasin細胞松弛素；Alexa Fluor 555 phalloidin（# A34055，Thermo life）；

基本描述

鬼筆環肽（Phalloidin），又(yòu)稱鬼筆鵝膏素，是從(cóng)毒蘑菇鬼筆鵝膏（Amanita phalloides）中分離到(dào)的一(yī)種七氨基酸多(duō)肽毒素，以極高(gāo)親和力和特異性結合肌動蛋白(bái)絲F-actin（聚合形式的肌動蛋白(bái)）（Kd=20nM）。鬼筆環肽将肌動蛋白(bái)聚合的臨界濃度降至≤1μg/ml，從(cóng)而用作一(yī)種聚合增強劑。熒光(guāng)探針标記的鬼筆環肽（Fluorescent-conjugated Phalloidins）能(néng)對組織培養細胞、組織切片和無細胞制備物(wù)進行肌動纖維絲染色。經鬼筆環肽标記的肌動纖維絲仍能(néng)維持标記前的許多(duō)功能(néng)特征包括能(néng)夠與肌球蛋白(bái)相(xiàng)互作用。

産品應用

 1. [Fluorescent staining of actin filaments in fixed tissue sections and tissue culture cells preparations]; 對固定的組織切片和組織細胞培養物(wù)進行肌動蛋白(bái)絲的熒光(guāng)染色；

2. [Preparation of stabilized fluorescent actin filaments in vitro.] 體外制備穩定的熒光(guāng)肌動蛋白(bái)絲；

肌動蛋白(bái)染色（Actin Staining）特别适用于确定活細胞和固定細胞内細胞骨架的結構和功能(néng)。活細胞内的肌動蛋白(bái)細胞骨架很有活力和結構不穩定，因此，對肌動蛋白(bái)結構的标記或染色前需用甲醛固定。

産品特征

1. 外觀：紅(hóng)色固體；

2. 純度：>99%

3. 分子量：1775

4. 保存：凍幹粉4℃幹燥保存半年(nián)有效；儲存液-20℃避光(guāng)保存半年(nián)有效；

5. 重溶方法：使用前簡單離心使得産品都降至管底，加入500µl 100%甲醇充分溶解後配置成14µM儲存液。建議按照(zhào)10×50µl分裝，-20℃避光(guāng)保存，穩定保存6個(gè)月(yuè)。

6. 光(guāng)譜圖：

應用實例

Fig 1.  Actin-stain^TM 555-鬼筆環肽（Cytoskeleton, PHDH1）染色下(xià)的Swiss 3T3成纖維細胞。Actin Stress Fibers stained with Acti-stain™ 555 in a Swiss 3T3 cell. Swiss 3T3 cell with activated Rho, nucleus is stained with Dapi (blue) and F-actin is stained with Acti-stain™ 555 (red F-actin, Cat.# PHDH1).

使用方法【僅作參考】：

1. 免疫熒光(guāng)（Immunofluorescence）

需要材料：1）Actin-stain^TM 555 Phalloidin（PHDH1）；2）蓋玻片爬片生(shēng)長(cháng)達到(dào)半彙合的Swiss 3T3細胞；3）PBS buffer；4）固定劑；5）破膜劑；7）抗熒光(guāng)淬滅封片劑；8）100nM DAPI in PBS；11）載玻片；12）蓋玻片封固液（透明指甲油）；

操作流程：咨詢我司工(gōng)作人員(yuán)或詳見(jiàn)說明書。

2. 制備穩定的熒光(guāng)标記肌動蛋白(bái)絲（Preparation of stabilized fluorescent actin filaments）

體外肌動蛋白(bái)運動試驗（in vitro motility assays），穩定的熒光(guāng)标記肌動蛋白(bái)絲是研究肌球馬達蛋白(bái)非常優秀的底物(wù)材料。Actin-stain^TM 555 Phalloidin結合對肌球蛋白(bái)ATPase的肌動蛋白(bái)激活無影響。

需要材料：

1）肌動蛋白(bái)Actin protein（#AKL99-A）；

2）通(tōng)用肌動蛋白(bái)緩沖液General Actin buffer（#BSA01）；

3）10×聚合緩沖液Polymerization buffer（#BSA02）；

4）Actin-stain^TM 555 Phalloidin（PHDH1）；

操作流程：

1)  用250ul 添加0.2mMATP和1.0mM DTT的通(tōng)用肌動蛋白(bái)緩沖液來重懸兔肌肉肌動蛋白(bái)（rabbit muscle actin，#AKL99-A），使其濃度為(wèi)1mg/ml。

2)  加入1/10體積的聚合緩沖液來聚合肌動蛋白(bái)，室溫孵育1h。

3) 用含70nM Actin-stain^TM 555 phalloidin的聚合緩沖液按照(zhào)1:100的比例稀釋聚合的肌動蛋白(bái)絲。

4) 吸取1ul标記好的肌動蛋白(bái)滴在已滴有一(yī)滴抗熒光(guāng)淬滅劑的載玻片上(shàng)。

5) 取一(yī)幹淨蓋玻片蓋在液滴處，用紙(zhǐ)巾吸掉多(duō)餘液體。

6) 熒光(guāng)顯微鏡觀察熒光(guāng)纖維。肌動蛋白(bái)絲平均長(cháng)度為(wèi)2-10um，在4℃避光(guāng)能(néng)穩定保存1周。

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【說明A】：本品約可做300-350張細胞爬片；

【說明B】：若想保持優異的染色結果，又(yòu)受成本所限制，強力推薦使用我司MKbio的同類型産品iFluor 555 Phalloidin（# MX4411-300T），絕對進口品牌，經實驗室和客戶的雙重驗證，染色優異，價格實惠，歡迎咨詢和訂購。電(diàn)話：021-54736159，QQ：2971634497。

【提示A】：見(jiàn)我司整理的MKbio鬼筆環肽及衍生(shēng)物(wù)（Phalloidin and Phalloidin Conjugates）産品專題。

【提示B】：見(jiàn)我司整理的Cytoskeleton 鬼筆環肽（Phalloidin）産品專題。

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引用文獻（#PHDH1-A）：

Burks et al., 2013. ISGylation governs the oncogenic function of Ki-Ras in breast cancer. Oncogene. doi:10.1038/onc.2012.633

Andersen et al., 2012. Escherichia coli uropathogenesis in vitro: Invasion, cellular escape, and secondary infection analyzed in a human bladder cell infection model. Infect. Immun. 80, 1858-1867.

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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