Enhanced Potassium Green-2 AM 鉀離子指示探針

【務必注意】：初次使用離子探針的用戶，強烈建議配合：Pluronic F-127, Cell Culture Tested 細胞培養級（MS4301-1G）一(yī)起使用，以提高(gāo)探針的水(shuǐ)溶性和胞内加載性。 

産品标簽

Enhanced Potassium Green-2 AM（EPG-2 AM） K+indicator；PBFI AM 鉀離子指示劑/探，SBFI AM 鈉離子指示劑/探針，Asante Potassium Green-2，Valinomycin 缬氨黴素

産品信息

産品描述

Enhanced Potassium Green-2 AM（EPG-2 AM）是Asante Potassium Green-2 AM（APG-2 AM）的替代物(wù)，

是一(yī)種具細胞膜滲透性的新型K+熒光(guāng)探針，具有容易加載、緩慢(màn)洩露、良好光(guāng)穩定性和寬動力學範圍等理想特征，正好彌補傳統K+熒光(guāng)探針PBFI AM（#MX4510）的缺陷。EPG-2 AM被可見(jiàn)光(guāng)激發，最佳激發波長(cháng)為(wèi)517nm，但也能(néng)被傳統波長(cháng)488nm激發檢測。雖然不是比率型探針，但其寬廣的動力學範圍使其甚至能(néng)檢測到(dào)變化很小(xiǎo)的K+濃度。EPG-2 AM用近紅(hóng)外波長(cháng)的雙光(guāng)子激發下(xià)信号很強且抗熒光(guāng)淬滅很好。也适用于共聚焦顯微鏡、流式細胞儀和高(gāo)通(tōng)量篩選分析。

保存與運輸方法

保存：-20ºC避光(guāng)幹燥保存，1年(nián)有效。

運輸：冰袋運輸。

産品特性

1）   分子式：C55H64Cl2N2O19

2）   分子量：1128.02 g/mol

3）   純度：＞ 80%（HPLC）

4）   最大激發波長(cháng)：526 ± 3 nm（in methanol）

5）   最大發射波長(cháng)：546 ± 3 nm（in methanol）

6）   解離常數（Kd）：18mM

7）   動力學範圍（Fmax/Fmin）：12

8）   溶解性：溶于DMSO

9）   化學結構式：

常用操作流程（AM熒光(guāng)探針）

以下(xià)步驟僅做參考，具體請根據實際情況或參考文獻資料來調整。

1.1    使用無水(shuǐ)DMSO溶解EPG-2 AM（Mw：1128.02 g/mol）配制成1-5mM儲存液，比如往50μg EPG-2 AM凍幹粉内加入22μl DMSO，充分溶解後配制成2mM儲存液。-20ºC分裝幹燥凍存，避免反複凍融。

1.2    通(tōng)常在含适當濃度AM探針的無血清培養基中實現探針加載。建議正式實驗前向加載培養基内加入Pluronic F-127以促進AM探針的分散。可用DMSO配置20% Pluronic F-127儲存液或其他濃度，隻需在正式實驗前将其與EPG-2 AM儲存液混合，然後加入加載培養基，保證其終濃度＜0.1%（w/v）。

1.3    室溫或37℃孵育細胞（可能(néng)在室溫的探針加載質量會(huì)高(gāo)些），孵育濃度通(tōng)常為(wèi)1-10µM，孵育時間通(tōng)常為(wèi)30-60min，具體的請根據實際情況或參考文獻資料。

1.4    【可選】對于大分子量AM探針（分子量≥1000g/mol），孵育結束，加入不含AM探針的細胞加載培養基額外孵育20-60min，以确保細胞将AM基團完全去酯化。

1.5    用不含血清和探針的培養基清洗細胞至少一(yī)次，以降低(dī)細胞外背景熒光(guāng)。

1.6    最後用合适的儀器(qì)來檢測熒光(guāng)信号。檢測用最大激發波長(cháng)517nm，最大發射波長(cháng)540nm。

【注意】：

a)      如果細胞加載培養基是以碳酸氫鈉為(wèi)緩沖體系，那麽加載需要含5% CO2的環境内進行，以防止因CO2損失引起的培養基堿化。

b)      如果細胞加載培養基含血清，那需适當提高(gāo)AM探針工(gōng)作濃度，以補償因AM探針與血清蛋白(bái)結合引起的損失。

c)      某些情況下(xià)，對分子量接近或超過1000的AM探針，需用不含AM探針的細胞加載緩沖液進一(yī)步孵育20-60min，以保證細胞内酯酶能(néng)充分降解AM基團。

d)      探針的加載時間和濃度因具體的細胞類型而有差異，請根據具體的細胞類型來優化。

e)      對每一(yī)種探針有必要通(tōng)過校準（calibration）來得到(dào)實際解離常數（Kd）。物(wù)理條件(jiàn)如溫度，pH，離子強度或溶液粘度，以及探針與細胞組成成分如蛋白(bái)質的相(xiàng)互作用，都會(huì)影響Kd值。實際情況細胞内的Kd比體外溶液通(tōng)常要高(gāo)。因此，細胞水(shuǐ)平研究有必要進行校準确認實際Kd值。

f)       對于EPG-2，雖然最大激發波長(cháng)在517m，但其極強的熒光(guāng)亮度使其能(néng)夠用标準的488nm濾片來激發，與Fluo系列的可見(jiàn)光(guāng)鈣離子指示探針檢測手段一(yī)緻。值得注意的是，488nm激發下(xià)得到(dào)的熒光(guāng)強度約為(wèi)最大激發波長(cháng)下(xià)的40%。

注意事(shì)項

1）   EPG-2 AM易受潮，粉末需幹燥保存；粉末需用無水(shuǐ)DMSO溶解，配制儲存液（如10mM），置于-20℃幹燥避光(guāng)保存，小(xiǎo)量分裝避免反複凍融，至少3個(gè)月(yuè)穩定。

2）   為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海夢澤生物科技有限公司是一(yī)家涉足于生(shēng)命科學和生(shēng)物(wù)技(jì)術(shù)領域研究的試劑、儀器(qì)和實驗室消耗品與實驗服務工(gōng)作，主要從(cóng)事(shì)細胞生(shēng)物(wù)學、植物(wù)學、分子生(shēng)物(wù)學、免疫學、生(shēng)物(wù)化學、蛋白(bái)組學。生(shēng)物(wù)制藥與診斷試劑研發生(shēng)産等領域。 本公司秉承“以人為(wèi)本，以誠為(wèi)信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為(wèi)廣大客戶提供優質産品。

引用文獻：

 [1]Zhang P, Qiu Y, Wang Y, Xiao L, Yu S, Shi M, Ni Y, Miron RJ, Pu Y, Zhang Y. Nanoparticles Promote Bacterial Antibiotic Tolerance via Inducing Hyperosmotic Stress Response. Small. 2022 May;18(19):e2105525. doi: 10.1002/smll.202105525. Epub 2022 Apr 10. PMID: 35398987.

E. coli and S. aureus were stained with 2 µm EPG-2 (Shanghai Maokang Biotechnology Co., MX4513)

[2] Zhou Y, Chen Y, Zhong X, Xia H, Zhao M, Zhao M, Xu L, Guo X and You C-G (2022) Lipoxin A4 attenuates MSU-crystal-induced NLRP3 inflammasome activation through suppressing Nrf2 thereby increasing TXNRD2. Front. Immunol. 13:1060441. doi: 10.3389/fimmu.2022.1060441

Intracellular potassium ions were detected by EPG-2 AM (MX4513; Maokang Biotechnology, Shanghai, China), a fluorescence indicator for potassium ions.

[3] Chai Q, Yu S, Zhong Y, Lu Z, Qiu C, Yu Y, Zhang X, Zhang Y, Lei Z, Qiang L, Li BX, Pang Y, Qiu XB, Wang J, Liu CH. A bacterial phospholipid phosphatase inhibits host pyroptosis by hijacking ubiquitin. Science. 2022 Oct 14;378(6616):eabq0132. doi: 10.1126/science.abq0132. Epub 2022 Oct 14. PMID: 36227980.

At 48 hours after infection, medium was replaced with FBS-free DMEM containing 10 μM of Enhanced Potassium Green-2 (EPG-2) AM (Shanghai Maokang Biotechnology),