Aminophenyl fluorescein (APF) 氨基苯基熒光(guāng)素

産品信息

産品描述

氨基苯基熒光(guāng)素（APF）和羟苯基熒光(guāng)素（HPF）是由T. Nagano開(kāi)發的兩種活性氧（Reactive oxygen species, ROS）指示劑，比H2DCFDA（DCFH-DA, DCFH）具更優秀的特異性和穩定性。APF和HPF顯示有限的非選擇性反應，和相(xiàng)對較高(gāo)的光(guāng)誘導氧化抗性。APF和HPF具細胞膜滲透性，本身無熒光(guāng)，直到(dào)與羟基自(zì)由基或過氧亞硝基陰離子反應，還(hái)能(néng)與次氯酸陰離子反應，産生(shēng)強綠色熒光(guāng)（Ex/Em，~490/515nm），可用熒光(guāng)顯微鏡、高(gāo)通(tōng)量成像儀、熒光(guāng)酶标闆或流式細胞儀檢測。

本品以粉末形式提供，可直接溶于DMF配制成5mM儲存液，常用工(gōng)作濃度範圍1-10μM，需根據自(zì)身的實驗體系或參考文獻進行優化。

産品特性

1）同義名：3'-(p-aminophenyl) fluorescein氨基苯基熒光(guāng)素

2）分子式：C26H17NO5

3）分子量：423.42

4）純度：≥95%

5）Ex/Em：490/515nm

6）溶解性：溶于DMSO（10mM）、DMF（5mM）

7）化學結構：

保存與運輸方法

保存：-20ºC避光(guāng)幹燥保存，至少1年(nián)有效。

運輸：冰袋運輸。

使用方法

一(yī)、儲存液制備

将低(dī)溫保存的1mg粉末置于室溫回溫至少20min，之後加入472μl 無水(shuǐ)DMF配置成5mM儲存液。充分溶解和混勻後，按照(zhào)單次用量分裝，-20ºC避光(guāng)幹燥保存，避免反複凍融。

【注】：APF能(néng)溶于DMSO（10mM），但有數據顯示DMSO是羟基自(zì)由基的淬滅劑，會(huì)幹擾檢測和降低(dī)靈敏性。因此，建議用DMF作為(wèi)溶劑。

二、溶液體系檢測

正式實驗前，取一(yī)管HPF儲存液置于室溫回溫，使其充分融解。之後用合适的緩沖液（比如HHBS緩沖液，PBS緩沖液）稀釋到(dào)所需的工(gōng)作濃度。建議起始濃度為(wèi)1-10μM，需根據自(zì)身的實驗體系或參考文獻進行優化。

三、細胞體系檢測

以下(xià)實驗步驟僅做參考，最佳的工(gōng)作濃度、孵育時間和溫度需根據實際情況進行調整。在加入APF工(gōng)作液之前按需處理細胞。

1）   根據具體用量，将DMF儲存液用HHBS緩沖液或其他生(shēng)理緩沖液稀釋成1-10μM工(gōng)作液。

2）   根據實驗設計處理細胞（比如，RASM細胞用50-100nM 血管緊張素II處理3-5h）。

3）   取步驟1）準備的1-10μM工(gōng)作液加入細胞，37ºC孵育20-60min。

4）   吸掉染色工(gōng)作液，用HHBS或其他生(shēng)理緩沖液替換。

5）   用合适的熒光(guāng)儀器(qì)（Ex/Em=492/515nm）來檢測。

【注1】：BSA和酚紅(hóng)會(huì)影響熒光(guāng)，需謹慎使用。

【注2】：HPF和APF能(néng)用于溶液體系或胞内ROS檢測。

注意事(shì)項

1）APF和HPF僅用于科研研究，不可用于體外診斷研究。

2）APF和HPF産生(shēng)的熒光(guāng)相(xiàng)對于其他活性氧探針比如DCFH弱很多(duō)，這是探針本身的特性決定的（見(jiàn)附表1 活性氧探針（HPF, APF, DCFH）對各種活性氧物(wù)質的反應特異性）。

3）為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。 

相(xiàng)關産品

附表1 活性氧探針（HPF, APF, DCFH）對各種活性氧物(wù)質的反應特異性

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海夢澤生物科技有限公司是一(yī)家涉足于生(shēng)命科學和生(shēng)物(wù)技(jì)術(shù)領域研究的試劑、儀器(qì)和實驗室消耗品與實驗服務工(gōng)作，主要從(cóng)事(shì)細胞生(shēng)物(wù)學、植物(wù)學、分子生(shēng)物(wù)學、免疫學、生(shēng)物(wù)化學、蛋白(bái)組學。生(shēng)物(wù)制藥與診斷試劑研發生(shēng)産等領域。 本公司秉承“以人為(wèi)本，以誠為(wèi)信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為(wèi)廣大客戶提供優質産品。

文獻引用：

【1】Wu Q et al. Cascade enzymes within self-assembled hybrid nanogel mimicked neutrophil lysosomes for singlet oxygen elevated cancer therapy. Nat Commun. 2019 Jan 16;10(1):240.

The aminophenyl fluorescein (APF) as the HClO detector were purchased from Shanghai Maokangbio. The further EDT related therapeutic species including the ROS, 1O2 and the intermediate HClO have been detected in tumour tissues of different groups by using the corresponding fluorescent probes, DCFH-DA, SOSG and aminophenyl fluorescein (APF, as HClO detector).

【2】Juan J et al. Dynamic tracking of bulk nanobubbles from microbubbles shrinkage to collapse. Colloids and Surfaces A: Physicochemical and Engineering Aspects. Volume 589, 20 February 2020, 124430

3′- p - (aminophenyl) fluorescein (APF) was purchased from Shanghai Maokang Biotechnology Co., Ltd. (shanghai, China).

【3】Yahui Zhang, Weizhou Sha, Yang Liu, Wei Wang, Zhi Yuan. A facile composite nanoparticle promoted by photoelectron transfer and consumption for tumor combination therapy. Mater. Chem. Front., 2020,4, 3047-3056  https://doi.org/10.1039/D0QM00447B

3′-(p-aminophenyl) fluorescein (APF) was purchased from maokang-bio (Shang hai).

【4】Li L, Shao C, Liu T, Chao Z, Chen H, Xiao F, He H, Wei Z, Zhu Y, Wang H, Zhang X, Wen Y, Yang B, He F, Tian L. An NIR-II-Emissive Photosensitizer for Hypoxia-Tolerant Photodynamic Theranostics. Adv Mater. 2020 Nov;32(45):e2003471. doi: 10.1002/adma.202003471. Epub 2020 Oct 7. PMID: 33029855.

2,7-Dichlorodi-hydrofluorescein diacetate (DCFH-DA), aminophenyl fluorescein (APF), and singlet oxygen sensor green (SOSG) were obtained from Shanghai Maokang Biotechnology Co., Ltd. (Shanghai, China).

【5】Liu J, Yuan Y, Cheng Y, Fu D, Chen Z, Wang Y, Zhang L, Yao C, Shi L, Li M, Zhou C, Zou M, Wang G, Wang L, Wang Z. Copper-Based Metal-Organic Framework Overcomes Cancer Chemoresistance through Systemically Disrupting Dynamically Balanced Cellular Redox Homeostasis. J Am Chem Soc. 2022 Mar 23;144(11):4799-4809. doi: 10.1021/jacs.1c11856. Epub 2022 Feb 22. PMID: 35192770. 

(APF, •OH) (Shanghai Maokang Biotechnology Co., Ltd.)

HCT116/L-OHP or HCT116 cells

【6】Nuo Yu, Wenzhi Tu, Pu Qiu, Qian Ren, Xuming Chen, Meifang Zhu, Yong Liu, Zhigang Chen, Full-route advances via biomimetic and biodegradable ultrasmall-in-nano architectures with radiation-photo synergy,

Nano Today,Volume 43,2022,101427,ISSN 1748-0132, https://doi.org/10.1016/j.nantod.2022.101427.

APF),1,1′-dioctadecyl-3,3,3′,3′-tetramethylindocarbocyanine perchlorate (DiI) were purchased from Shanghai Maokang Biotechnology Co., LTD