TMB One Solution (HRP-based ELISA)

單組分TMB顯色液（ELISA，HRP顯色用）

産品标簽

TMB One Solution 單組份TMB溶液；ELISA；HRP (Horseradish Peroxidas) 辣根過氧化物(wù)酶；DAB；CAS NO:64285-73-0；

産品信息

産品描述

酶聯免疫分析技(jì)術(shù)（ELISA）廣泛用于抗原、半抗原或抗體的定量或定性分析，辣根過氧化物(wù)酶（HRP）及其偶聯物(wù)是ELISA技(jì)術(shù)常用的一(yī)種酶，能(néng)催化底物(wù)如3,3'5,5'-四甲基聯苯胺（TMB）發生(shēng)顯色反應，從(cóng)而進行定量或定性分析。由于TMB比其他顯色底物(wù)具更高(gāo)的靈敏度且無緻癌性被廣泛使用，TMB主要用于ELISA，免疫斑點雜(zá)交或免疫組化等實驗，也有報(bào)道将其用于氯的檢測分析。

通(tōng)常TMB顯色試劑由多(duō)個(gè)組分構成，必須在使用前進行配制，并且容易産生(shēng)沉澱，使用相(xiàng)對不便且容易導緻檢測結果不穩定。本品采用全新的TMB顯色技(jì)術(shù)，将所有相(xiàng)關試劑全部配在一(yī)個(gè)溶液，即僅由單一(yī)溶液組成，不僅簡化了操作步驟，而且使檢測結果更加穩定可靠。

本品專門(mén)為(wèi)ELISA實驗而設計。檢測原理在于HRP或其他适當過氧化物(wù)酶能(néng)催化生(shēng)成可溶的藍色産物(wù)，此時通(tōng)常可在370nm測定吸光(guāng)度。當顯色反應被酸性溶液（如0.5-2M H2SO4，0.5M HCl，1M H3PO4）終止後，産物(wù)由藍色轉為(wèi)黃色，此時可在450nm測定吸光(guāng)度。由于本品顯色敏感度高(gāo)，線性濃度範圍較寬，極其适合用于定量ELISA分析。

本品用于ELISA檢測，每個(gè)樣品通(tōng)常使用0.1ml顯色液，則100ml本品約檢測1000個(gè)樣品，500ml本品約檢測5000個(gè)樣品。

保存與運輸方法

保存：2-8℃避光(guāng)保存，2年(nián)有效。

運輸：冰袋運輸。

注意事(shì)項

1) 本品含TMB和H2O2，對人體有刺激性，請注意防護。

2) 如發現本品出現渾濁或顔色變為(wèi)藍色，請停止使用。

3) 為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

使用方法（ELISA）

1) 使用之前，取出适量單組份TMB顯色液，使其回到(dào)室溫再開(kāi)始使用；

2) 參考ELISA檢測試劑盒的實驗步驟，當與HRP标記抗體孵育一(yī)段時間後，用适當洗滌液洗滌3-5次，每次3-5min。

3) 洗滌完畢後，去除洗滌液，加入100μl單組份TMB顯色液。

4) 室溫避光(guāng)孵育5-30min或更長(cháng)時間（可長(cháng)達24h），直至顯色到(dào)預期深淺。【注意】：建議根據實驗需求選擇最佳試劑用量、顯色時間和反應溫度。

5) 直接在370nm測定吸光(guāng)度。或者加入100μl 0.5-2M H2SO4終止反應，随後在450nm測定吸光(guāng)度。

常用問題

1. 背景顯色太深

1）如果背景（沒有樣品的對照(zhào)）顯色太深，一(yī)方面需考慮使用适當的封閉液進行封閉，如商業(yè)化封閉液或者和一(yī)抗相(xiàng)同來源的血清（10%）進行封閉。另一(yī)方面，使用經過适當吸附的二抗，以減小(xiǎo)二抗的非特異性吸附。

2）可以考慮縮短顯色時間，或降低(dī)二抗濃度。另外，選擇适當強度的洗滌液，或延長(cháng)洗滌時間也會(huì)有所幫助。

2. 沒有顯色或顯色太弱

1）适當提高(gāo)一(yī)抗或二抗的濃度。檢測二抗效果，滴一(yī)滴稀釋二抗在離心管内，檢測二抗是否被正常顯色。

2）可以考慮使用更加靈敏的放(fàng)大檢測體系，例如生(shēng)物(wù)素檢測體系。

3）可以适當延長(cháng)顯色時間。

4）如果上(shàng)述改進不能(néng)獲得預期效果，可以考慮更換效果更好的一(yī)抗或ELISA試劑盒。

相(xiàng)關産品

 — — Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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