DiA 細胞膜熒光(guāng)探針

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細胞膜熒光(guāng)探針，DiI，DiO，DiD，DiR，DiA，CM-DiI，神經示蹤，傳統細胞膜熒光(guāng)探針

訂購信息：

産品描述：

DiA為(wèi)親脂性氨基苯乙烯基染料（dialkylaminostyryl dye），擴散進入細胞膜（比DiO擴散速度快），常用于神經元的示蹤。最顯著的特點就(jiù)是能(néng)與DiI（DiIC18(3)）聯合使用進行雙色标記。DiA能(néng)用于甲醛固定組織染色，研究發現某些情況下(xià)當DiO不能(néng)标記固定組織時，DiA可得到(dào)良好标記。DiA水(shuǐ)溶液中的熒光(guāng)非常弱，但與磷脂雙層膜結合後，光(guāng)譜遷移熒光(guāng)明顯加強。因其發射光(guāng)譜非常廣，可被綠色，橙色，甚至是紅(hóng)色濾片檢測到(dào)。

本品以DiA的碘鹽形式提供，英文名：4-(4-(Dihexadecylamino)styryl)-N-methylpyridinium iodide，純度≥90%，适用于熒光(guāng)檢測研究。

基本特性：

1）同義名：4-Di-16-ASP;4-(4-(Dihexadecylamino)styryl)-N-methylpyridinium iodide;

2）分子式：C46H79IN2

3）分子量：787.04g/mol

4）外觀：紅(hóng)色或橙色固體

5）純度：≥90%

6）Ex/Em：490/611nm（甲醇）

7）溶解性：溶于乙醇，DMSO，甲醇

8）推薦濾光(guāng)器(qì)：Omega-XF21, Chroma-31024

9）化學結構圖：

保存與運輸方法

保存：-20ºC避光(guāng)幹燥保存，有效期一(yī)年(nián)。

運輸：冰袋運輸。

注意事(shì)項

1）熒光(guāng)染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光(guāng)，以減緩熒光(guāng)淬滅。

2）為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

使用方法

【注意】以下(xià)使用方法僅用作參考，可根據具體的實驗條件(jiàn)做出調整。

1. 染色液制備

1）儲存液制備：用DMSO或乙醇配置濃度1～5 mM的儲存液。例如，取25mg DiA（Mw：787.04g/mol）溶于6.35ml無水(shuǐ)DMSO中，充分溶解，即得到(dào)5mM的儲存液。【注意】未使用的儲存液分裝儲存在-20℃，避免反複凍融，且要避光(guāng)保存。

2）工(gōng)作液制備：用合适的緩沖液（如：無血清培養基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，調整到(dào)1～5 μM的工(gōng)作濃度。【注意】工(gōng)作液最終濃度需要根據不同細胞系和實驗體系來優化。建議從(cóng)推薦濃度開(kāi)始，以10倍範圍為(wèi)區間進行最優濃度的摸索。

2. 懸浮細胞染色

1）加入适當體積的染色工(gōng)作液重懸細胞，使其密度為(wèi)1×106/mL。

2）37℃孵育細胞2～20min，不同的細胞最佳培養時間不同。可以20min作為(wèi)起始孵育時間，之後優化以保證得到(dào)均一(yī)化的标記結果。

3）孵育結束，按1000～1500 rpm離心5min。

4）去除上(shàng)清液，之後輕柔加入37℃預熱的生(shēng)長(cháng)培養液重懸細胞。

5）再重複3），4）步驟兩次。

3. 貼壁細胞染色

1）将貼壁細胞培養于無菌蓋玻片上(shàng)。

2）從(cóng)培養基中移走蓋玻片，濾掉過量培養液，将蓋玻片放(fàng)在潮濕的小(xiǎo)室内。

3）在蓋玻片的一(yī)角加入100μL的染色工(gōng)作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。

4）37℃孵育細胞2～20min，不同的細胞最佳培養時間不同。可以20min作為(wèi)起始孵育時間，之後優化以保證得到(dào)均一(yī)化的标記結果。

5）吸掉染色工(gōng)作液，用培養液洗蓋玻片2～3次，每次用預溫的培養基覆蓋所有細胞，孵育5～10min，然後吸走培養基。 

附表 DiD，DiO，DiI，DiR和DiA光(guāng)譜特征彙表

— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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