廣譜型蛋白(bái)酶抑制劑混合物(wù)（不含EDTA，100× DMSO儲液）

産品标簽

AEBSF；Pepstatin A；Roche cOmplete™ Protease Inhibitor Cocktail 蛋白(bái)酶抑制劑混合物(wù)；Pierce Halt Protease Inhibitor Cocktail；Roche PhosSTOP™ 磷酸酶抑制劑混合物(wù)； PMSF；

産品信息

溫馨提示：見(jiàn)我司（懋康生(shēng)物(wù)）整理的蛋白(bái)酶抑制劑cocktail産品專題（含 RochecOmplete™）。

溫馨提示：見(jiàn)我司（懋康生(shēng)物(wù)）整理的磷酸酶抑制劑cocktail産品專題（含 RochePhosSTOP™）。

溫馨提示：見(jiàn)我司（懋康生(shēng)物(wù)）整理的單一(yī)蛋白(bái)酶/磷酸酶抑制劑産品專題。

産品描述

細胞内源蛋白(bái)的表達和降解一(yī)般維持平衡狀态，因此正常生(shēng)理條件(jiàn)下(xià)内源蛋白(bái)含量相(xiàng)對穩定。然而體外研究中，蛋白(bái)合成過程終止，而細胞裂解得到(dào)的粗提物(wù)含大量的内源性蛋白(bái)酶，依然能(néng)發揮蛋白(bái)水(shuǐ)解活性，影響蛋白(bái)得率，進而幹擾相(xiàng)關蛋白(bái)表達和功能(néng)研究。因此，為(wèi)了防止蛋白(bái)純化過程的蛋白(bái)不被這些蛋白(bái)酶降解，需要加入蛋白(bái)酶抑制劑來抑制其活性。

本品是多(duō)種常見(jiàn)蛋白(bái)酶抑制劑的混合物(wù)，包含AEBSF、Aprotinin、Bestatin、E-64、Leupeptin、Pepstatin，廣譜抑制來源于原代細胞、哺乳動物(wù)細胞、動植物(wù)、細菌、酵母等組織或細胞等裂解物(wù)中的多(duō)種蛋白(bái)酶活性。本品不含EDTA（一(yī)種金屬蛋白(bái)酶抑制劑），适用于活性中心為(wèi)金屬離子依賴性蛋白(bái)的研究。本品兼容于後續的固定化金屬離子親和層析（Immobilized metal-chelate affinity chromatography, IMAC）、2-D 凝膠電(diàn)泳以及天然凝膠電(diàn)泳等蛋白(bái)分析研究。

本品以100× DMSO儲存液的形式提供，适用于蛋白(bái)純化，蛋白(bái)免疫印迹（Western Blot），免疫（共）沉澱（IP/Co-IP），蛋白(bái)下(xià)拉（Pull-down assay），免疫熒光(guāng)（IF），免疫組化（IHC），以及激酶研究等多(duō)種實驗。

産品成分

保存與運輸方法

保存：-20℃凍存，1年(nián)有效。

運輸：冰袋運輸。

使用方法

1）使用前室溫平衡直至完全溶解【注意：DMSO低(dī)溫下(xià)融化較慢(màn)，建議25℃下(xià)融化】，低(dī)速震蕩以保證各成分均勻。

2）按照(zhào)1:100的比例（體積比）加到(dào)适量抽提試劑（比如細胞或組織裂解液），混勻，再進行樣品蛋白(bái)的提取。或根據實驗目的以及所培養的特定細胞和組織，對使用比例進行摸索和優化。【注】：按照(zhào)1:100建議比例，1ml本品可以抑制從(cóng)20g濕重細胞裂解獲得的蛋白(bái)酶活性。

注意事(shì)項

1）傳統蛋白(bái)酶抑制劑（比如：AEBSF、Aprotinin、Bestatin、E-64、Leupeptin）不能(néng)夠抑制某些去泛素化（DUB）蛋白(bái)酶（如ATAXIN-3）的功能(néng) 【來源文獻：Neil D. Rawlings, Guy Salvesen et al. Handbook of Proteolytic Enzymes, Vol.1, 2012】。

2）本品具廣譜蛋白(bái)酶抑制活性，不具有磷酸酶抑制活性。若需要進行磷酸化蛋白(bái)研究，請選擇廣譜型磷酸酶抑制劑混合物(wù)（100×儲液）（貨号：MP1612）來滿足實驗要求。

3）為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

常見(jiàn)問題

1. 為(wèi)什麽要用蛋白(bái)酶抑制劑混合物(wù)（Protease Inhibitor Cocktail）？

本蛋白(bái)酶抑制劑混合物(wù)屬于低(dī)毒且全面型的蛋白(bái)保護試劑，最大限度保護蛋白(bái)使其免于被内源性蛋白(bái)酶降解。目前對微量表達蛋白(bái)如信号通(tōng)路(lù)蛋白(bái)，受體蛋白(bái)，使用免疫共沉澱（Co-IP），蛋白(bái)下(xià)拉（Pull-down assay）等來獲取樣品，此時蛋白(bái)酶抑制劑混合物(wù)的加入尤為(wèi)重要，因其比單一(yī)抑制劑（比如PMSF）更為(wèi)有效。

2. 蛋白(bái)酶抑制劑混合物(wù)（Protease Inhibitor Cocktail）是否能(néng)進一(yī)步稀釋使用？

蛋白(bái)酶活性抑制效果和衆多(duō)因素有關，比如目标蛋白(bái)降解的難易程度，蛋白(bái)酶類型和濃度，蛋白(bái)酶活性高(gāo)低(dī)，以及抑制劑的濃度都會(huì)影響最終的保護效果。本品采用經典濃度配比，确保對不同類型的蛋白(bái)酶都有充分的抑制效果，建議按照(zhào)建議比例（1:100）稀釋使用。如果有使用其他品牌的蛋白(bái)酶抑制劑混合物(wù)，以更低(dī)的濃度達到(dào)良好的效果，可參照(zhào)相(xiàng)應比例來進行實驗。建議在推薦比例使用上(shàng)達到(dào)理想效果的基礎上(shàng)，可做進一(yī)步稀釋的摸索和測試。

3. 傳統實驗常用PMSF來保護蛋白(bái)，蛋白(bái)酶抑制劑混合物(wù)（Protease Inhibitor Cocktail）與其相(xiàng)比有何優勢？

PMSF（苯甲基磺酰氟，CAS：329-98-6）是經典的絲氨酸蛋白(bái)酶抑制劑，廣泛用于細胞裂解純化蛋白(bái)過程。然而，其具有許多(duō)明顯的缺點，逐步被保護效果更好且更安全的單一(yī)蛋白(bái)酶抑制劑或蛋白(bái)酶抑制劑混合物(wù)所替代。主要缺點1）毒性較高(gāo)，半緻死量為(wèi)200mg/kg；而其替代物(wù)AEBSF，半緻死量為(wèi)2834mg/kg，毒性遠(yuǎn)低(dī)于PMSF十四倍多(duō)，同時保持相(xiàng)當的抑制效果，且對很多(duō)種絲氨酸蛋白(bái)酶的抑制比PMSF更迅速；2）半衰期短，在水(shuǐ)溶液中隻有30min，細胞裂解過程中太容易失效。而蛋白(bái)酶抑制劑cocktail不僅僅保護全面且效果持續更加久。

4. DMSO是否會(huì)對實驗結果産生(shēng)副作用？

DMSO（二甲基亞砜）基本不會(huì)影響實驗結果。生(shēng)物(wù)科學領域DMSO為(wèi)很多(duō)生(shēng)物(wù)活性物(wù)質的有機(jī)溶劑，比如蛋白(bái)結晶，免疫共沉澱等要求較高(gāo)實驗中也會(huì)使用DMSO。細胞研究中，低(dī)溫條件(jiàn)下(xià)DMSO還(hái)是一(yī)種廣泛使用且優秀的細胞冷凍保護劑。

常見(jiàn)蛋白(bái)酶抑制劑和磷酸酶抑制劑：

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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