MKRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000×in Water)

MKRed核酸凝膠染料（效果同GelRed，DuRed）

搜索關鍵詞：

MKRed 核酸凝膠染料；GelRed；DuRed；Ethidium Bromide, EB；Ames Test 艾姆斯試驗法；GoldView；SYBR Green I；

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産品特征

□  傳統核酸染料（Ethidium Bromide, EB，溴化乙錠）的無毒安全替代品，經艾姆斯試驗法測試認證。

□  新型核酸染料（GelRed，DuRed）的同等優質替代品，經實驗室内部測試認證【見(jiàn)圖1】。

産品優勢

□  安全無毒：獨特油性大分子，無法穿透細胞膜進入細胞；不易揮發，人體不會(huì)吸入；艾姆斯試驗法（Ames Test）表明凝膠染色濃度下(xià)完全沒有誘變性，與EB的強緻癌性相(xiàng)比，是一(yī)種安全無毒的核酸染料。

□  适用範圍廣：适用于瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠電(diàn)泳的dsDNA, ssDNA以及RNA染色。

□  操作靈活簡單：可選擇電(diàn)泳前（膠染法）或電(diàn)泳後（泡染法）染色。使用方法同EB，GelRed，DuRed

，不用重新适應和摸索新的電(diàn)泳和染色條件(jiàn)。

□  檢測方便：與EB具相(xiàng)同的光(guāng)譜特征，使用與觀察EB相(xiàng)同的普通(tōng)紫外凝膠透射儀即可，無需更改濾光(guāng)片和觀察裝置。标準EB濾光(guāng)片或SYBR濾光(guāng)片都适用。

□  靈敏度高(gāo)，對核酸遷移影響小(xiǎo)：适用于各種大小(xiǎo)片段的電(diàn)泳染色。電(diàn)泳條帶不易完全，片段不易遷移，不像SYBR Green I，染料濃度高(gāo)時會(huì)引起條帶彎曲和遷移現象【見(jiàn)附件(jiàn)常見(jiàn)核酸染料的性能(néng)比較】。

□  穩定性高(gāo)：室溫穩定保存一(yī)年(nián)，長(cháng)期不用可置于+4℃保存二年(nián)。

□  易去除，兼容性強：用酚/氯仿提取和乙醇沉澱，或商業(yè)化的膠回收試劑盒可輕易去除核酸中的染料；與常見(jiàn)的下(xià)遊應用如克隆，連接和測序兼容。

應用示例：

圖1. GelRed（Biotium）與MKRed（MKbio, Shanghai）的使用比較。1-6是不同上(shàng)樣量的Marker III（依次為(wèi)100ng、50ng、12.5ng、6.25ng、3.125ng）；7-11是不同上(shàng)樣量的血液基因組DNA（依次為(wèi)200ng、150ng、100ng、50ng、25g）。凝膠配制條件(jiàn)：往25ml凝膠溶液加入0.25g瓊脂糖，微波爐加熱至充分溶解，冷卻至60℃左右，加入2μl GelRed或MKRed染料，混勻，倒膠。電(diàn)泳條件(jiàn)：1%瓊脂糖凝膠，150V，20min。

圖2. EB（MPbio, USA）與MKRed（MKbio, Shanghai）的使用比較。1-5是不同管菌液的PCR産物(wù)（目的片段500bp左右）。凝膠配制條件(jiàn)：往20ml凝膠溶液加入0.2g瓊脂糖，微波爐加熱至充分溶解，冷卻至60℃左右，加入2μl EB或MKRed染料，混勻，倒膠。電(diàn)泳條件(jiàn)：1%瓊脂糖凝膠，150V，25min。

常見(jiàn)問題

1.  MKRed能(néng)用于ssDNA或RNA染色嗎(ma)？

回複：MKRed能(néng)用于ssDNA和RNA染色，但對dsDNA的檢測靈敏度比ssDNA或RNA高(gāo)2倍。

2.  MKRed與下(xià)遊應用如克隆，連接或測序兼容嗎(ma)？

回複：是的，建議用酚-氯仿提取和乙醇沉澱，或用商業(yè)化的膠回收試劑盒來去除DNA中的染料。

3.  MKRed與什麽上(shàng)樣緩沖液兼容？

回複：我們一(yī)般使用6×上(shàng)樣緩沖液（含15%甘油，7.5% Ficoll 400，0.05%溴酚藍和0.1% Patent Blue VF）。上(shàng)樣緩沖液中若含SDS，可能(néng)會(huì)引起預制MKRed凝膠内的核酸條帶發生(shēng)彌散。若發生(shēng)這種情況，建議使用泡染色對核酸染色。

4.  是否能(néng)将MKRed加入DNA中，然後進行電(diàn)泳檢測？使用濃度多(duō)少？

回複：可以，使用濃度0.5×即可。但我們推薦用膠染法或泡染法來檢測，能(néng)保證得到(dào)理想結果。

5. 哪種發射濾片适用于MKRed？

回複：使用EB濾片成像即可。SYBR濾片也能(néng)用于成像并得到(dào)較好的結果。

6.  電(diàn)泳後的MKRed預制膠能(néng)重複使用？

回複：不建議如此使用，因再次電(diàn)泳信号降低(dī)很明顯。

7. MKRed的工(gōng)作原理是什麽？化學結構是什麽？

回複：工(gōng)作原理是通(tōng)過專一(yī)嵌入并結合DNA。化學結構不對外公開(kāi)。

8. 電(diàn)泳過程中MKRed會(huì)發生(shēng)遷移嗎(ma)？

回複：和EB一(yī)樣，MKRed不會(huì)遷移。沒有必要加染料到(dào)電(diàn)泳緩沖液中，用MKRed染色的凝膠比EB更加均化。

9.  MKRed需要避光(guāng)使用嗎(ma)？

回複：MKRed非常穩定。可在室内光(guāng)下(xià)使用，但染料建議避光(guāng)保存。

10. 不小(xiǎo)心将MKRed暴露在室内光(guāng)下(xià)，是否還(hái)能(néng)用？

回複：建議MKRed避光(guāng)長(cháng)期保存。有客戶不小(xiǎo)心将其暴露在室内光(guāng)下(xià)一(yī)個(gè)月(yuè)，MKRed仍能(néng)很好的染色。

11. MKRed能(néng)用于甲醛、聚丙烯酰胺、DGGE、EMSA或PFGE凝膠？

回複：是的。有文獻報(bào)道用MKRed的同類染料GelRed對乙二醛和甲醛瓊脂糖凝膠進行RNA電(diàn)泳染色（膠染法）。用泡染法對聚丙烯酰胺、DGGE和EMSA凝膠染色。對PFGE凝膠可用膠染法或泡染法。

12. MKRed能(néng)用于彗星實驗（COMET assay）？

回複：是的，可用泡染法來染色。

保存：+4℃避光(guāng)幹燥保存，2年(nián)有效。

運輸：室溫運輸。

注意事(shì)項

1） MKRed雖為(wèi)安全無毒的核酸染料，對人無傷害，但請科研人員(yuán)操作過程中注意防護，盡量避免與染料的直接接觸。且染料的廢棄需符合當地規定。

2） 為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

使用方法

一(yī)、膠染法（同EB，電(diàn)泳前染色）

1.   制膠時加入MKRed 核酸染料（每50mL 瓊脂糖溶液中加入5μLMKRed 10,000×水(shuǐ)溶液）。

2.   按照(zhào)常規方法進行電(diàn)泳。

3.   用普通(tōng)紫外凝膠透射儀（300nm處有最佳激發）觀察以及标準EB濾光(guāng)片成像。

【注意】

1)  此方法比較節省染料，500 μL染料大約可以做100塊 50mL的膠。

2)   由于MKRed具有良好的熱穩定性，可以直接添加到(dào)熱的瓊脂糖溶液中而不需要等待溶液冷卻。搖晃，振蕩或者翻轉以保證染料充分混勻。也可以選擇将MKRed儲液加到(dào)瓊脂糖粉末和電(diàn)泳緩沖液中，然後用微波爐或其他常用方式加熱以制備瓊脂糖凝膠。

3)   MKRed兼容所有常用的電(diàn)泳緩沖溶液。

4)   含有染料的預制凝膠溶液可以大量制備，在室溫下(xià)避光(guāng)保存直至用完。

5)   如果總是看(kàn)到(dào)條帶彌散或分離不理想，建議使用泡染法染色以确認問題是否與染料有關。如果染色後問題依舊(jiù)存在，則說明問題與染料無關，請嘗試：降低(dī)瓊脂糖濃度；選用更長(cháng)的凝膠；延長(cháng)凝膠時間以保證邊緣清晰；改進上(shàng)樣技(jì)巧或選擇泡染法染色。

6)  膠染法不适合預制聚丙烯酰胺凝膠，對于聚丙烯酰胺凝膠請使用泡染法。

二、泡染法（電(diàn)泳後染色）

1.   按照(zhào)常規方法進行電(diàn)泳。

2.   用H2O将MKRed 10,000×水(shuǐ)溶液稀釋約3,300倍制成3× 染色液（例如：将15μL MKRed 10,000×水(shuǐ)溶液和5mL 1M NaCl混合，之後加到(dào)45mL H2O中混勻）。【注意】：染色液中加入0.1M NaCl能(néng)提高(gāo)靈敏度，但如果膠染色再次使用會(huì)比較容易有沉澱産生(shēng)。

3.    将凝膠小(xiǎo)心地放(fàng)入合适的容器(qì)中，緩慢(màn)加入足量的3× 染色液浸沒凝膠。室溫振蕩染色30min左右，最佳染色時間根據凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同而略有不同。對于含3.5～10％丙烯酰胺的聚丙烯酰胺凝膠，染色時間通(tōng)常介于30min-1h，丙烯酰胺含量增加，染色時間延長(cháng)。

4.   不需要脫色，但若有需要可用水(shuǐ)清洗一(yī)下(xià)凝膠以降低(dī)背景。

5.   用普通(tōng)紫外凝膠透射儀（300nm處有最佳激發）觀察以及标準EB濾光(guāng)片成像。

【注意】

1）  用泡染法染色時，染料用量較多(duō)。單次使用的染色液可重複使用3次左右。

2）  3× MKRed染色液可以大量制備，在室溫下(xià)避光(guāng)保存直至用完。

常用核酸染料的性能(néng)比較

— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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