SYBR Green I (10,000×in DMSO) 核酸凝膠染料

産品标簽

GoldView；Acridine Orange 吖啶橙；GelRed；DuRed；GelGreen；溴化乙錠（EB）；SYBR Green I；

産品信息

産品描述

SYBR Green I，是目前檢測瓊脂糖凝膠和聚丙烯酰胺凝膠中dsDNA最靈敏的染料之一(yī)，最低(dī)檢出限為(wèi)20pg DNA（254nm紫外發射光(guāng)），60pg DNA（300nm透射光(guāng)）；還(hái)可用于寡核苷酸檢測（1-2ng，300nm透射光(guāng)），比溴化乙錠EB的靈敏度高(gāo)50-100倍。

SYBR Green I檢測凝膠中核酸的非凡靈敏度歸因其獨特的染料特性：①SYBR Green I具有超強的DNA結合力，與DNA結合後熒光(guāng)顯著增強—至少比EB高(gāo)出一(yī)個(gè)數量級；②DNA/SYBR Green I複合物(wù)的熒光(guāng)量子産率（~0.8）比DNA/EB（~0.15）高(gāo)5倍多(duō)；③SYBR Green I在瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠中迅速滲透，在缺乏DNA時背景熒光(guāng)可忽略，讓染色步驟快速，且成像之前無需脫色。

SYBR Green I因與DNA結合能(néng)力強，既能(néng)在電(diàn)泳前（預染），也能(néng)在電(diàn)泳後（後染）對DNA進行染色。還(hái)可對毛細管電(diàn)泳分離的DNA進行染色。SYBR Green I與DNA的結合不會(huì)抑制多(duō)種常見(jiàn)的限制性内切酶活性，包括Hind III和EcoR I，可直接進行消化或連接。用于瓊脂糖凝膠電(diàn)泳檢測DNA後，還(hái)可直接将DNA轉移到(dào)膜上(shàng)，進行後續的核酸印迹雜(zá)交分析。

本品為(wèi)溶于DMSO的10,000×的SYBR Green I核酸染料,電(diàn)泳級。

保存與運輸方法

保存：-20°C避光(guāng)幹燥保存，1年(nián)有效。

運輸：冰袋運輸。

注意事(shì)項

1. 獨立實驗室進行的艾姆斯試驗表明SYBR Green I的緻突變性明顯比EB要低(dī)很多(duō)。但是，必須警告用戶注意，目前尚無關于SYBR Green I對人體的緻突變性或毒性的數據。由于該染料與核酸結合，應當被看(kàn)作潛在誘變劑，使用時要小(xiǎo)心謹慎。在處理DMSO儲存液時應特别小(xiǎo)心，因DMSO能(néng)促進有機(jī)分子進入組織。染料的廢棄處理應當符合當地的規定。

2. SYBR Green I對dsDNA的檢測靈敏度非常高(gāo)（20pg，254nm紫外發射光(guāng)），但對ssDNA和RNA的靈敏度稍低(dī)（100-300pg，254nm紫外發射光(guāng)），使之成為(wèi)複雜(zá)溶液中檢測dsDNA的理想選擇。尤其是複雜(zá)溶液中的ssDNA和RNA可能(néng)會(huì)掩蓋結果的時候，如凋亡特有的連續梯度條帶apoptosis ladders。

3. SYBR Green I的最大激發波長(cháng)為(wèi)497nm，但在～290nm和～380nm處有二級激發峰。與DNA結合的SYBR Green I的熒光(guāng)發射集中在520nm。這些光(guāng)譜特性讓SYBR Green I适用于多(duō)種凝膠檢測儀，從(cóng)紫外反射（上(shàng)紫外）和透射儀（下(xià)紫外）到(dào)氩離子激光(guāng)器(qì)和水(shuǐ)銀(yín)燈激發的凝膠掃描儀。

4. 預染色方法，電(diàn)泳時間不要超過2h，否則SYBR Green I會(huì)從(cóng)DNA上(shàng)脫離出來，産生(shēng)彌散狀條帶。

5. 紫外照(zhào)射透視下(xià)，與dsDNA結合的SYBR Green I呈綠色熒光(guāng)。如果膠中含ssDNA，則熒光(guāng)顔色為(wèi)橘黃色而不是綠色。

6. 為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

使用方法

一(yī)、使用前準備工(gōng)作

使用前将本品取出并回溫至室溫，使DMSO徹底解凍、溶液均一(yī)。于離心機(jī)上(shàng)短暫離心确保所有溶液到(dào)管底。第一(yī)次使用時可将本品分裝成多(duō)個(gè)小(xiǎo)份後凍存，小(xiǎo)份染料能(néng)更快溶解。

二、染色方法

1．電(diàn)泳後的DNA染色（後染）

1）在瓊脂糖或非變性聚丙烯酰胺凝膠上(shàng)進行電(diàn)泳。

【注】：TBE和TAE緩沖液均适合于SYBR Green I染色。

2）用TE、TAE或TBE緩沖液将SYBR Green I儲存液進行1:10,000倍稀釋。

【注】：

①SYBR Green I染色對pH敏感，為(wèi)獲得最佳的靈敏度，應确認在染色溫度下(xià)染色液的pH值在7.5- 8.0之間（pH8.0更佳）。

②用水(shuǐ)配制的染色液不如用緩沖液配制的穩定，為(wèi)确保最大的染色靈敏度，必須在24h内使用。此外，用pH低(dī)于7.5或高(gāo)于8.0的緩沖液配制的染色液也不太穩定，染色效率有所下(xià)降。

3）染液要充分覆蓋凝膠，室溫輕搖孵育10-40min。

【注】：

①推薦用塑料而不是玻璃容器(qì)來儲存染色液，因染料會(huì)吸附到(dào)玻璃表面。

②染色過程避光(guāng)進行，建議在容器(qì)上(shàng)加蓋鋁箔或置于暗(àn)處。

③凝膠厚度及瓊脂糖或聚丙烯酰胺的比例不同，染色時間将有所不同。

④無需脫色。

⑤染色液可置暗(àn)處（最好是冷藏）放(fàng)置1周或更久，重複使用最多(duō)4次。

2．電(diàn)泳前的DNA染色（預染）

1）配制成SYBR Green I預制凝膠

臨灌膠前将SYBR Green I儲存液按照(zhào)1:10,000倍稀釋到(dào)凝膠溶液中，預制成含有SYBR Green I染料的瓊脂糖或非變性聚丙烯酰胺凝膠。電(diàn)泳結束後即可在适合的凝膠成像儀下(xià)檢測。【預染推薦用此法】

預制的SYBR Green I凝膠的DNA檢測下(xià)限（大約為(wèi)30-40pg/條帶），可能(néng)略高(gāo)于電(diàn)泳後染色（＜20pg/條帶）。此外，在SYBR Green I凝膠中的DNA片段遷移率明顯比無染料凝膠中的相(xiàng)同片段慢(màn)。

2）作為(wèi)DNA模闆預染标記

一(yī)般而言，DNA在電(diàn)泳前與染料工(gōng)作液（1:10,000倍稀釋）至少孵育15min。

三、凝膠成像（紫外或藍光(guāng)透射儀或紫外頂置光(guāng)源直射）

可在紫外或藍光(guāng)光(guāng)源下(xià)輕松觀察到(dào)用SYBR Green I染色的DNA。

四、從(cóng)dsDNA中去除SYBR Green I

使用簡單的乙醇沉澱能(néng)從(cóng)dsDNA中去除99%以上(shàng)的SYBR Green I染料。

将SYBR Green I染色的DNA移至100mM NaCl，加入2.5倍體積的無水(shuǐ)或95%的乙醇。在冰上(shàng)孵育約20min，4℃離心至少10min。去除乙醇，并用70%乙醇洗滌沉澱。讓乙醇揮發，并用TE重懸雙鏈DNA。

 — — Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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