目錄号 | MX4239-100UL | 售價 | 948.00元 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
規格 | 100ul | 運輸溫度 | 冰袋運輸 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
其他名稱 | 保存溫度 | -20℃保存 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CAS号 | N/A | 有效期 | 1年(nián) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
應用 | 訂購數量 |
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
産品簡介: SYBR 14 Nucleic Acid Stain (5mM) 綠色熒光(guāng)核酸染料
産品信息
産品描述 SYBR 14核酸染料(SYBR 14 Nucleic Acid Stain)通(tōng)常用來監測精子活力,通(tōng)過聯合SYBR 14和碘化丙啶(PI)的雙染方式能(néng)評估精液中的活精子占比。SYBR 14是一(yī)種核酸染料,與DNA結合後的最大吸收波長(cháng)是488nm,發射波長(cháng)是518nm。SYBR 14将活精子的核染成明亮綠色,反之,PI僅将喪失膜完整性的無運動精子染成紅(hóng)色。活/死精子的占比通(tōng)過先用SYBR/PI染色,之後再用流式分析染料攝取的方法進行判斷。 本品以DMSO儲存液形式提供,濃度為(wèi)5mM。隻需用合适的生(shēng)理緩沖液稀釋到(dào)工(gōng)作濃度進行簡單孵育即可,适用于哺乳動物(wù)精液樣本。
保存與運輸方法 保存:-20℃避光(guāng)幹燥保存,至少1年(nián)有效。 運輸:冰袋運輸。 注意事(shì)項 1) 再次凍存本品前務必擰緊蓋子,管子建議直立保存。 2) 目前沒數據表明該探針具緻畸性或毒性。由于該探針與核酸結合,可能(néng)被當作一(yī)種潛在的突變劑,需做适當的防護措施。由于DMSO能(néng)促進有機(jī)分子進入組織,此儲存液在使用的過程中務必妥善操作。根據當地的政策來處理使用本品後的廢液。 3) 熒光(guāng)染料均存在淬滅問題,請盡量注意避光(guāng),以減緩熒光(guāng)淬滅。 4) 為(wèi)了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。
染色流程 1. 工(gōng)作液的準備 1.1 初次使用,将低(dī)溫保存的SYBR 14(5mM)從(cóng)冰箱取出,置于室溫或25℃溫育至少30min,使其充分融化。按照(zhào)單次用量分裝後,置于≤-20℃避光(guāng)幹燥保存。 1.2 于正式使用前,用合适的生(shēng)理緩沖液稀釋SYBR 14(5mM)到(dào)10-20µM的工(gōng)作液。
2. 染色流程 以下(xià)染色流程僅用作基本參考。試劑濃度必須根據精液來源、精子密度以及樣本内的其他材料來進行優化調整。 2.1 用含10% BSA的HEPES緩沖鹽溶液(10mM HEPES, 150mM NaCl,10% BSA,pH 7.4)稀釋樣本(比如:精液樣本) 2.2 取5µl步驟1.2新鮮制備的SYBR 14工(gōng)作液,加入1ml稀釋樣本中。 2.3 37℃孵育5-10min。 2.4 用熒光(guāng)顯微鏡(FITC濾片)或流式細胞儀(488nm激發器(qì),530/30nm濾片)進行樣本分析。
染色示例 文獻來源:Anna Dziekońska et al. Fluorescence Microscopy and Flow-Cytometry Assessment of Substructures in European Red Deer Epididymal Spermatozoa after Cryopreservation. Animals 2023, 13(6), 990;https://doi.org/10.3390/ani13060990
實驗目的:精子活力(Sperm Motility) 實驗步驟j:用SYBR-14和碘化丙啶(PI)評估活力(質膜完整性)。稀釋精子樣本(200µl)加入2µl SYBR-14(1mM)和2µl PI(2.4 μM in Tyrode’s salt solution),37℃避光(guāng)孵育10min。分别觀察帶綠頭的精子(SYBR-14+/PI−,具完整膜結構的活精子)和帶紅(hóng)頭的精子(死精子)。
實驗步驟k:為(wèi)了評估質膜完整性,精子用SYBR-14和碘化丙啶(PI)染色。稀釋樣本(500µl)用3µl SYBR-14(1mM)和3µl PI(2.4 μM in Tyrode’s salt solution)染色。帶綠色熒光(guāng)的SYBR-14陽性精子和PI陰性精子被分類為(wèi)具完整膜結構的活精子細胞。
染色圖片(流式):
Fig 1:(A) Sperm viability (SYBR+/PI−). (B) Cytogram of a SYBR-14/PI stain.
相(xiàng)關産品
|