MTT Cell Proliferation Assay Kit

MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒

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MTT噻唑蘭；台盼藍染色法；CCK-8 細胞增殖和毒性檢測試劑盒；WST-8；CAS：298-93-1；

産品訂購：更大包裝或産品技(jì)術(shù)問題，請來電(diàn)/在線咨詢，電(diàn)話：021-54736159 。網站：www.maokangbio.com。

基本描述：

MTT也稱作溴化噻唑藍四氮唑，是一(yī)種黃色染料，已經廣泛替代傳統的台盼藍染色法或者放(fàng)射性同位素插入法，用來檢測細胞活力、細胞增殖以及毒性分析。MTT是一(yī)種可接受氫離子的化合物(wù)染料，帶正電(diàn)荷，具有細胞膜滲透性。活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能(néng)夠将外源進入的MTT還(hái)原成為(wèi)水(shuǐ)不溶性的藍紫色MTT-甲臜結晶，而死細胞不具此功能(néng)。甲臜結晶不能(néng)穿透細胞膜，因此沉積在處于增殖且未受損傷的細胞内。在特定溶劑的作用下(xià)完全溶解甲臜結晶，然後通(tōng)過酶标儀測定570 nm附近的吸光(guāng)度。細胞增殖越多(duō)，則吸光(guāng)度越高(gāo)；細胞毒性越大，則吸光(guāng)度越低(dī)。

本MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒（MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit）采用獨特的甲臜溶解液，能(néng)夠非常好的完全甲臜結晶，使檢測本底低(dī)、靈敏度高(gāo)，且線性範圍寬。

産品組分

保存與運輸方法

保存：-20℃避光(guāng)保存，1年(nián)有效。MTT溶液（5mg/ml）第一(yī)次使用亦可根據需要分裝後-20℃避光(guāng)保存；甲臜溶解液亦可室溫保存。

運輸：冰袋運輸。

注意事(shì)項

1. 使用96孔闆進行檢測，如果細胞培養時間較長(cháng)，一(yī)定要注意蒸發的問題。①由于96孔闆周圍一(yī)圈最容易蒸發，可以采取棄用周圍一(yī)圈的辦法，改加PBS、無菌水(shuǐ)或培養液；②可以把96孔闆置于靠近培養箱内水(shuǐ)源的地方以緩解蒸發。

2. MTT溶液在低(dī)溫下(xià)會(huì)凝固，請置于室溫或20-25℃水(shuǐ)浴溫育片刻至全部融解後再使用。

3. MTT溶液需盡量減少反複凍融的次數，若單次用量很少，建議根據需求分裝後置于-20℃保存。MTT溶液顔色如變為(wèi)灰綠色，請勿使用。

4. 甲臜溶解液當置于-20℃保存需解凍使用，或室溫保存産生(shēng)沉澱，可置于37℃水(shuǐ)浴孵育以促進溶解，并且必須全部溶解後混勻使用。

5. 加入甲臜溶解液後請輕輕混勻，但需注意避免産生(shēng)泡沫。亦可借助顯微鏡觀察甲臜是否完全溶解。

6. 為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

使用方法（以96孔闆為(wèi)例）

1. 收集對數生(shēng)長(cháng)期的細胞，用含血清的培養液配制成單細胞懸液，調整細胞密度，以每孔3000-10,000個(gè)細胞接種到(dào)96孔闆，每孔體積100µl，培養闆的邊緣孔用無菌PBS填充。設置空白(bái)孔和對照(zhào)孔。

   【注①】：通(tōng)常情況，細胞增殖實驗每孔加3000個(gè)細胞，細胞毒性實驗每孔加6000個(gè)細胞。具體每孔所用細胞數目，需根據細胞大小(xiǎo)、增殖速度的快慢(màn)等來決定。

   【注②】：需設置空白(bái)孔（不含細胞，含培養液、MTT和甲臜溶解液），對照(zhào)孔（含細胞、相(xiàng)同濃度的藥物(wù)溶解介質、培養液、MTT和甲臜溶解液），每組設置3個(gè)複孔。

2. 37℃，5% CO2繼續培養或根據實驗具體需求進行培養，一(yī)般培養6-24h。

3. 根據實驗具體需求，給予0-20µl幹預藥物(wù)處理，37℃，5% CO2繼續培養至合适時間。

4. 小(xiǎo)心吸掉培養液，每孔加入100µl新鮮培養液，再加入10µl MTT溶液（5 mg/ml），加樣時盡量勤換槍頭，控制加量誤差。繼續培養4h。

5. 小(xiǎo)心吸掉培養液，每孔加入110µl甲臜溶解液，置搖床上(shàng)低(dī)速振蕩10min，使得結晶物(wù)充分溶解。可在光(guāng)學顯微鏡下(xià)觀察結晶物(wù)是否完全溶解。如果紫色結晶較小(xiǎo)或較少，溶解的時間會(huì)短些；如果紫色結晶較大或較多(duō)，溶解的時間會(huì)長(cháng)些。

6. 在酶标儀上(shàng)搖勻後，選擇570nm，測定吸光(guāng)度。記錄結果，比色以空白(bái)調零。

   【注①】：對于細胞毒性檢測，以未經藥物(wù)處理細胞的OD值為(wèi)100%，然後計算(suàn)藥物(wù)處理細胞所占的比率（x），公式如下(xià)：OD（未經藥物(wù)處理細胞）/OD（藥物(wù)處理細胞）=100%/x。然後建立直方圖。

 相(xiàng)關産品

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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