目錄号 | MF2292-5000UL | 售價 | 1299.00元 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
規格 | 5000UL | 運輸溫度 | 幹冰運輸 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
其他名稱 | 保存溫度 | -80℃保存 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CAS号 | N/A | 有效期 | 6個(gè)月(yuè) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
應用 | 訂購數量 |
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
産品簡介: Stbl4 Chemically Competent Cell 大腸杆菌化學感受态細胞
産品标簽: Stbl4;Stbl3;Stbl2;HB101;Stable;Direct repeats正向重複片段;Retroviral sequences 逆轉錄病毒序列;
産品訂購:更大包裝或産品技(jì)術(shù)問題,請來電(diàn)/在線咨詢,電(diàn)話:021-54736159 。網站:www.maokangbio.com。
産品組分:
菌株描述 Stbl4菌株來源于Stbl2菌株,可用于慢(màn)病毒載體或逆轉錄病毒載體的構建,特别适用于克隆不穩定插入片段(比如:正向重複序列,逆轉錄病毒序列)。為(wèi)了改善性能(néng),引入gal-突變和F'附加體,lon-複原為(wèi)野生(shēng)型lon+等位基因。Stbl4不僅保持Stbl2的遺傳特性(維護不穩定插入片段),而且據報(bào)道還(hái)能(néng)用于複雜(zá)二級代謝物(wù)的發現、CRISPR文庫構建和維護。Stbl4中的mcrA 突變和mcrBC-hsdRMS-mrr序列的删除允許甲基化基因組序列的克隆。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩定和高(gāo)純質粒DNA的獲得。lacZ∆M15标記使其可用于藍/白(bái)斑篩選。此菌株具有四環素抗性。
Stbl4菌株基因型:mcrA Δ(mcrBC-hsdRMS-mrr) recA1 endA1 gyrA96 gal–thi-1 supE44 λ–relA1 Δ(lac-proAB) / F′ [proAB+lacIqZΔM15 Tn10(TetR)]
産品描述 本品是Stbl4菌株經特殊工(gōng)藝制作所得的感受态細胞,可用于DNA的熱擊轉化。經pUC19質粒檢測轉化效率>108 cfu/μg DNA。且在-80℃能(néng)穩定保存幾個(gè)月(yuè)轉化效率不發生(shēng)改變。
保存與運輸條件(jiàn): 保存:-80℃保存,六個(gè)月(yuè)有效。 運輸:幹冰運輸。
注意事(shì)項 1) 對不穩定DNA克隆或逆轉錄病毒/慢(màn)病毒載體克隆,塗闆後應在30℃培養,以減少錯(cuò)誤重組的發生(shēng)概率。 2) 後續進行陽性菌落的擴繁和高(gāo)純質粒的獲取,推薦選用TB培養基(Terrific Broth),優于LB或SOC。 3) 感受态細胞必須用幹冰運輸。感受态細胞應在-80℃保存,不可反複凍融且放(fàng)置時間過長(cháng),否則會(huì)減低(dī)感受态細胞的轉化效率。 4) 最好在冰上(shàng)融化感受态細胞。 5) 進行轉化操作時,需在相(xiàng)應溫度及無菌條件(jiàn)下(xià)進行。 6) 為(wèi)防止轉化實驗不成功,可保留部分連接反應液以重新轉化,将損失降到(dào)最低(dī)。 7) 産品包裝内含質粒pUC19 DNA(10 pg/μl),供對照(zhào)實驗用。 8) 為(wèi)了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。
使用方法【所有操作均在無菌條件(jiàn)的标準下(xià)進行】 1) 從(cóng)-80℃取出感受态細胞迅速置于冰浴中5min使其完全融化。 2) 向融化的感受态細胞中加入目的DNA(質粒或連接産物(wù)),用手輕彈混勻(避免用移液槍上(shàng)下(xià)吹打),冰浴靜(jìng)置25min。 3) 42℃熱擊45s,迅速将離心管轉移到(dào)冰浴中,冰上(shàng)靜(jìng)置2-3min。此過程不要搖動離心管。 4) 向每個(gè)離心管中加入700 μl無菌的LB培養基(不含抗生(shēng)素),混勻後置于37℃ 搖床,200 rpm振蕩培養70min,目的使質粒上(shàng)相(xiàng)關的抗性标記基因表達,使菌體複蘇。 【注意】:當質粒中含不穩定片段,30℃培養能(néng)降低(dī)錯(cuò)誤重組的概率。當轉化pUC19對照(zhào),需用37℃,225rpm培養60min來複蘇。】 5) 5000rpm離心1min,吸走600 μl上(shàng)清,留取100μl左右吹打重懸菌體,加到(dào)含相(xiàng)應抗生(shēng)素的LB固體瓊脂培養基上(shàng),用無菌的塗布棒将細胞均勻塗開(kāi),将平闆置于室溫(或37℃)直至液體被吸收,倒置培養,37℃過夜培養17-20h,或30℃過夜培養20-24h。 【注意】:當質粒中含不穩定片段,30℃培養能(néng)降低(dī)錯(cuò)誤重組的概率。當轉化pUC19對照(zhào),需37℃過夜培養。 【注意】:a)塗布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多(duō),可取少量轉化産物(wù)塗布平闆;反之,若轉化的DNA總量較少,可将所有轉化産物(wù)塗布平闆。b)新制備的固體培養基不易塗幹,可将平闆正置于37℃直至液體被吸收後再倒置培養。c)塗布剩餘的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉化菌落數過少,可以将剩下(xià)的菌液再塗布新培養基進行培養。
附表1固體和液體LB培養基配方
附表2液體TB培養基配方
附錄I幾款Stbl感受态細胞的參數比較表(适用于不穩定DNA的克隆)
附錄II幾款Stbl感受态細胞的基因型(适用于不穩定DNA的克隆)
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海夢澤生物科技有限公司是一(yī)家涉足于生(shēng)命科學和生(shēng)物(wù)技(jì)術(shù)領域研究的試劑、儀器(qì)和實驗室消耗品與實驗服務工(gōng)作,主要從(cóng)事(shì)細胞生(shēng)物(wù)學、植物(wù)學、分子生(shēng)物(wù)學、免疫學、生(shēng)物(wù)化學、蛋白(bái)組學。生(shēng)物(wù)制藥與診斷試劑研發生(shēng)産等領域。 本公司秉承“以人為(wèi)本,以誠為(wèi)信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為(wèi)廣大客戶提供優質産品。 |