| 目錄号 | MF2292-1000UL | 售價 | 299.00元 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 規格 | 1000UL | 運輸溫度 | 幹冰運輸 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 其他名稱 | 保存溫度 | -80℃保存 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| CAS号 | N/A | 有效期 | 6個(gè)月(yuè) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 應用 | 訂購數量 |
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産品簡介: Stbl4 Chemically Competent Cell 大腸杆菌化學感受态細胞
産品标簽： Stbl4；Stbl3；Stbl2；HB101；Stable；Direct repeats正向重複片段；Retroviral sequences 逆轉錄病毒序列；
産品訂購：更大包裝或産品技(jì)術(shù)問題，請來電(diàn)/在線咨詢，電(diàn)話：021-54736159 。網站：www.maokangbio.com。
産品組分：
菌株描述 Stbl4菌株來源于Stbl2菌株，可用于慢(màn)病毒載體或逆轉錄病毒載體的構建，特别适用于克隆不穩定插入片段（比如：正向重複序列，逆轉錄病毒序列）。為(wèi)了改善性能(néng)，引入gal-突變和F'附加體，lon-複原為(wèi)野生(shēng)型lon+等位基因。Stbl4不僅保持Stbl2的遺傳特性（維護不穩定插入片段），而且據報(bào)道還(hái)能(néng)用于複雜(zá)二級代謝物(wù)的發現、CRISPR文庫構建和維護。Stbl4中的mcrA 突變和mcrBC-hsdRMS-mrr序列的删除允許甲基化基因組序列的克隆。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩定和高(gāo)純質粒DNA的獲得。lacZ∆M15标記使其可用于藍/白(bái)斑篩選。此菌株具有四環素抗性。
Stbl4菌株基因型：mcrA Δ(mcrBC-hsdRMS-mrr) recA1 endA1 gyrA96 gal–thi-1 supE44 λ–relA1 Δ(lac-proAB) / F′ [proAB+lacIqZΔM15 Tn10(TetR)]
産品描述 本品是Stbl4菌株經特殊工(gōng)藝制作所得的感受态細胞，可用于DNA的熱擊轉化。經pUC19質粒檢測轉化效率＞108 cfu/μg DNA。且在-80℃能(néng)穩定保存幾個(gè)月(yuè)轉化效率不發生(shēng)改變。
保存與運輸條件(jiàn)： 保存：-80℃保存，六個(gè)月(yuè)有效。 運輸：幹冰運輸。
注意事(shì)項 1） 對不穩定DNA克隆或逆轉錄病毒/慢(màn)病毒載體克隆，塗闆後應在30℃培養，以減少錯(cuò)誤重組的發生(shēng)概率。 2） 後續進行陽性菌落的擴繁和高(gāo)純質粒的獲取，推薦選用TB培養基（Terrific Broth），優于LB或SOC。 3） 感受态細胞必須用幹冰運輸。感受态細胞應在-80℃保存，不可反複凍融且放(fàng)置時間過長(cháng)，否則會(huì)減低(dī)感受态細胞的轉化效率。 4） 最好在冰上(shàng)融化感受态細胞。 5） 進行轉化操作時，需在相(xiàng)應溫度及無菌條件(jiàn)下(xià)進行。 6） 為(wèi)防止轉化實驗不成功，可保留部分連接反應液以重新轉化，将損失降到(dào)最低(dī)。 7） 産品包裝内含質粒pUC19 DNA(10 pg/μl)，供對照(zhào)實驗用。 8） 為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。
使用方法【所有操作均在無菌條件(jiàn)的标準下(xià)進行】 1） 從(cóng)-80℃取出感受态細胞迅速置于冰浴中5min使其完全融化。 2） 向融化的感受态細胞中加入目的DNA（質粒或連接産物(wù)），用手輕彈混勻（避免用移液槍上(shàng)下(xià)吹打），冰浴靜(jìng)置25min。 3） 42℃熱擊45s，迅速将離心管轉移到(dào)冰浴中，冰上(shàng)靜(jìng)置2-3min。此過程不要搖動離心管。 4） 向每個(gè)離心管中加入700 μl無菌的LB培養基（不含抗生(shēng)素），混勻後置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養70min，目的使質粒上(shàng)相(xiàng)關的抗性标記基因表達，使菌體複蘇。 【注意】：當質粒中含不穩定片段，30℃培養能(néng)降低(dī)錯(cuò)誤重組的概率。當轉化pUC19對照(zhào)，需用37℃，225rpm培養60min來複蘇。】 5） 5000rpm離心1min，吸走600 μl上(shàng)清，留取100μl左右吹打重懸菌體，加到(dào)含相(xiàng)應抗生(shēng)素的LB固體瓊脂培養基上(shàng)，用無菌的塗布棒将細胞均勻塗開(kāi)，将平闆置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養，37℃過夜培養17-20h，或30℃過夜培養20-24h。 【注意】：當質粒中含不穩定片段，30℃培養能(néng)降低(dī)錯(cuò)誤重組的概率。當轉化pUC19對照(zhào)，需37℃過夜培養。 【注意】：a）塗布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多(duō)，可取少量轉化産物(wù)塗布平闆；反之，若轉化的DNA總量較少，可将所有轉化産物(wù)塗布平闆。b）新制備的固體培養基不易塗幹，可将平闆正置于37℃直至液體被吸收後再倒置培養。c）塗布剩餘的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以将剩下(xià)的菌液再塗布新培養基進行培養。
附表1固體和液體LB培養基配方
附表2液體TB培養基配方
附錄I幾款Stbl感受态細胞的參數比較表（适用于不穩定DNA的克隆）
附錄II幾款Stbl感受态細胞的基因型（适用于不穩定DNA的克隆）
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海夢澤生物科技有限公司是一(yī)家涉足于生(shēng)命科學和生(shēng)物(wù)技(jì)術(shù)領域研究的試劑、儀器(qì)和實驗室消耗品與實驗服務工(gōng)作，主要從(cóng)事(shì)細胞生(shēng)物(wù)學、植物(wù)學、分子生(shēng)物(wù)學、免疫學、生(shēng)物(wù)化學、蛋白(bái)組學。生(shēng)物(wù)制藥與診斷試劑研發生(shēng)産等領域。 本公司秉承“以人為(wèi)本，以誠為(wèi)信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為(wèi)廣大客戶提供優質産品。 |
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