Bradford Protein Quantification Kit

Bradford蛋白(bái)濃度測定試劑盒

産品信息

産品描述

目前，最常用的蛋白(bái)濃度檢測方法是：BCA蛋白(bái)定量試劑盒（BCA Protein Assay Kit）和Bradford蛋白(bái)定量試劑盒（Bradford Protein Assay Kit）。與蛋白(bái)濃度測定的其他方法（比如：BCA法和Lowry法）相(xiàng)比，Bradford法更簡單、更穩定、兼容性更好。Bradford法測定蛋白(bái)濃度不受絕大部分樣品中的化學物(wù)質的影響，尤其是還(hái)原劑的影響。樣品中β-巯基乙醇的濃度可高(gāo)達1M，DTT的濃度可高(gāo)達5mM，但本法受高(gāo)濃度去垢劑的影響明顯，需确保SDS低(dī)于0.01%，Triton X-100低(dī)于0.05%，Tween 20、60、80低(dī)于0.015%。含高(gāo)濃度去污劑的蛋白(bái)定量，建議采用BCA蛋白(bái)定量試劑盒（MP1902-500T）。

本Bradford蛋白(bái)定量試劑盒（Bradford Protein Assay Kit）的檢測原理是：在酸性乙醇溶液中，考馬斯亮藍G250（Coommassie Brilliant Blue G250）與蛋白(bái)結合顔色由棕色變為(wèi)藍色，溶液的最大吸收峰從(cóng)465nm遷移到(dào)595nm，顔色的變化與蛋白(bái)濃度成正比，因此，可通(tōng)過檢測595nm處的吸光(guāng)度對溶液中蛋白(bái)濃度進行測定。本試劑盒檢測速度很快，少量樣品一(yī)般隻需10min即可完成檢測，檢測濃度下(xià)限達到(dào)25μg/ml，最小(xiǎo)檢測蛋白(bái)量達到(dào)0.5μg，待測樣品體積為(wèi)1～20μl，在50~1000 μg/ml濃度範圍内有較好的線性關系。

産品組分

保存與運輸方法

保存：室溫保存，1年(nián)有效。蛋白(bái)标準配制成溶液後應置于-20℃保存。

運輸：室溫運輸。

自(zì)備材料

1. 酶标儀或分光(guāng)光(guāng)度計、96孔闆或比色杯、離心機(jī)、離心管

2. 蒸餾水(shuǐ)、0.9% NaCl或PBS

使用方法

1. 蛋白(bái)标準品的準備

1.1 取1ml蛋白(bái)标準配制液加入到(dào)20mg蛋白(bái)标準BSA中，充分溶解後配制成20mg/ml的蛋白(bái)标準溶液，配制後可立即使用，溶解後的蛋白(bái)标準溶液應-20℃長(cháng)期保存。

1.2 取适量20mg/ml蛋白(bái)标準，稀釋至終濃度為(wèi)0.5mg/ml或所需濃度。例如取25μl 20mg/ml蛋白(bái)标準，加入975μl稀釋液，充分混勻，即可配制成0.5mg/ml蛋白(bái)标準。【特别提示】：待測蛋白(bái)溶解于什麽樣的稀釋液中，蛋白(bái)标準也宜溶解于什麽樣的稀釋液中。但為(wèi)了簡便起見(jiàn)，一(yī)般也可以用0.9%NaCl或PBS稀釋标準品。稀釋後的0.5mg/ml蛋白(bái)标準可以-20℃長(cháng)期保存。

2. 蛋白(bái)濃度的測定

2.1 将标準品按0、1、2、4、8、12、16、20μl加到(dào)96孔闆或EP管中，加标準品稀釋液補足至20μl，相(xiàng)當于标準品濃度分别為(wèi)0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml。

2.2 加适當體積樣品到(dào)96孔闆或EP管中。如果樣品不足20μl，加标準品稀釋液補足到(dào)20μl，需注意記錄樣品體積。

2.3 各孔加入200μlG250染色液，室溫放(fàng)置3~5min。

2.4 酶标儀或分光(guāng)光(guāng)度計測定595nm波長(cháng)處的吸光(guāng)度（OD值），如無595nm，560～610nm波長(cháng)範圍的吸光(guāng)度也可。

2.5 根據BSA标準品的吸光(guāng)度（減去标準品中空白(bái)孔的OD值即最終的讀(dú)數），繪制标準曲線。依據标準曲線和使用樣品體積計算(suàn)樣品的蛋白(bái)濃度。

注意事(shì)項

1） G250染色液回複至室溫充分混勻後使用，有利于提高(gāo)檢測的靈敏度，加完G250染色液後，盡量在30min内完成吸光(guāng)度的測定，防止沉澱形成後影響實驗結果。

2） 蛋白(bái)标準在全部溶解後先混勻，再稀釋成一(yī)系列不同濃度的蛋白(bái)标準。

3） 待測蛋白(bái)溶解于什麽樣的稀釋液中，蛋白(bái)标準也宜溶解于什麽樣的稀釋液中，否則待測蛋白(bái)與蛋白(bái)标準所含非蛋白(bái)成分不一(yī)緻，有可能(néng)導緻測定不準确。

4） 建議每次測定都做标準曲線。因為(wèi)測定時顔色會(huì)随著(zhe)時間的延長(cháng)不斷加深，并且顯色反應的速度和溫度有關，所以除非精确控制顯色反應的時間和溫度，否則如需精确測定宜每次都做标準曲線。

5） 如果沒有酶标儀，也可以使用普通(tōng)的分光(guāng)光(guāng)度計測定，但應考慮根據比色杯的最小(xiǎo)檢測體積。應按比例适當加大G250染色液、樣品和标準品的用量使總體積不小(xiǎo)于最小(xiǎo)檢測體積，使用分光(guāng)光(guāng)度計測定蛋白(bái)濃度時，每個(gè)試劑盒可以測定的樣品數量可能(néng)會(huì)顯著減少。

6） 用比色杯測定蛋白(bái)含量時，由于考馬斯亮藍易結合石英比色杯，應優先選用一(yī)次性塑料比色杯，如用玻璃比色杯，比色完畢後應立即用乙醇清洗幹淨。

7） 試劑開(kāi)封後請盡快使用，以防影響後續實驗效果。

8） 為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

相(xiàng)關産品

— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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