目錄号 | MX3228-20T | 售價 | 880.00元 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
規格 | 20T | 運輸溫度 | 冰袋運輸 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
其他名稱 | 保存溫度 | -20℃保存 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CAS号 | N/A | 有效期 | 1年(nián) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
應用 | 訂購數量 |
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産品簡介: Caspase-8 Activity Assay Kit (Colorimetric) Caspase-8活性檢測試劑盒(比色法)
産品信息
産品描述 Caspases(Cysteine-requiringAspartate Proteases)是一(yī)個(gè)高(gāo)度保守的半胱氨酸蛋白(bái)酶家族,特異性識别底物(wù)中的天冬氨酸殘基,在介導細胞凋亡的過程中發揮著(zhe)非常重要的作用。Caspases以潛在酶原的形式表達,通(tōng)過自(zì)發蛋白(bái)分解機(jī)制或經其他蛋白(bái)酶(通(tōng)常是其他caspases)加工(gōng)處理的方式被活化。人caspases可細分為(wèi)三大功能(néng)組:細胞因子活化(caspase-1,-4,-5和-13),凋亡啓動(caspase-2,-8,-9和-10)和凋亡執行(caspase-3,-6和-7)。 Caspase-8(Caspase 8),也稱為(wèi)Mch5,MACH和FLICE,位于caspase級聯層次結構的頂端,是“上(shàng)遊”成員(yuán)或caspases的啓動家族。以無活性酶原的形式存在細胞内,分子量55kDa。一(yī)旦募集到(dào)死亡受體胞漿結構域(比如Fas),通(tōng)過配體蛋白(bái)FADD,即被激活,形成一(yī)個(gè)由18kDa和12kDa亞基組成的二聚體,進一(yī)步激活下(xià)遊的caspases(-3,-6和-7),進而切割關鍵的細胞底物(wù),導緻細胞凋亡性死亡。 Caspase-8活性檢測試劑盒(比色法)(Caspase-8 Activity Assay Kit, Colorimetric or Caspase-8 Colorimetric Assay Kit)以偶聯上(shàng)發色基團pNA的caspase-8序列特異性的多(duō)肽為(wèi)底物(wù)。當底物(wù)被caspase-8剪切後,發色基團被釋放(fàng)出來,進而用酶标儀或分光(guāng)光(guāng)度計來測定其吸光(guāng)值(λ=405nm或400nm)。通(tōng)過計算(suàn)OD凋亡誘導組/OD陰性對照(zhào)組的比值來确定凋亡誘導組caspase-3的活化程度。 本品适用于培養細胞以及新鮮組織的caspase-8活性檢測。
産品包裝
保存與運輸方法 保存:-20℃保存,1年(nián)有效。開(kāi)盒後置Lysis Buffer和2× Reaction Buffer于2-8℃保存。Caspase-8 Substrate和0.1M DTT需要避光(guāng)凍存。 運輸:冰袋運輸。
注意事(shì)項 1) Caspase-8 Substrate需避光(guāng)保存和使用。 2) 某些凋亡誘導劑誘導的凋亡可能(néng)通(tōng)過caspase-8非依賴的方式進行,此種情況使用本品檢測的caspase-8活性無明顯變化,則,需要考慮凋亡機(jī)制中的其他信号通(tōng)路(lù)。 3) 起始細胞數量需達3~5×106個(gè)或新鮮組織量達50~100mg,以保證達到(dào)測定所需的100~200μg蛋白(bái)量。Caspase-8的活性與細胞裂解後的蛋白(bái)含量有關,如測定的OD值偏低(dī),可通(tōng)過增加細胞數量或組織量的方法來提高(gāo)蛋白(bái)量。 4) 優先選擇測定λ=405nm的吸光(guāng)值;如有困難,再測定λ=400nm的吸光(guāng)值。 5) 為(wèi)了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。
使用方法 1.需要的其他試劑和材料 儀器(qì):低(dī)溫高(gāo)速離心機(jī)、酶标儀或分光(guāng)光(guāng)度計(100μl的比色皿)(λ=405nm或400nm)、微量移液器(qì)、玻璃勻漿器(qì)(組織樣本) 耗材:1.5ml微量離心管、96孔酶标闆(透明)或100μl的比色皿 試劑:PBS、蛋白(bái)定量試劑(比如:Bradford法蛋白(bái)濃度測定試劑盒)
2.試劑準備 2.1 Lysis Buffer(含DTT) 于實驗前,按每50μl Lysis Buffer 加入0.5μl DTT的比例準備足量的裂解工(gōng)作液,置于4℃或冰上(shàng)待用。 2.2 2×Reaction Buffer(含DTT) 于使用前,按每50μl 2×Reaction Buffer 加入0.5μl DTT的比例準備足量的反應工(gōng)作液。
3.樣本準備 3.1 細胞裂解 a)用合适方法誘導細胞凋亡,同時設立陰性對照(zhào)組(不加誘導劑),收集3~5×106個(gè)細胞。 b)PBS洗滌細胞2次(2000rpm,離心5min),盡量吸盡PBS上(shàng)清。 c)往離心的沉澱細胞中加入15~200μl預冷的Lysis Buffer(含DTT),吹打混勻。 d)置冰上(shàng)裂解20~60min,其間渦旋振蕩3~4次,每次10s;或凍融2~3次。 e)4℃,10,000rpm離心1min。 f)小(xiǎo)心吸取上(shàng)清(含裂解釋放(fàng)的蛋白(bái)質)轉移到(dào)新的EP管内,置于冰上(shàng)待用。 g)取少量上(shàng)清(1~2μl),用常規方法(Bradford法)測定蛋白(bái)濃度。 3.2 組織裂解 a)取50~100mg組織置于培養皿内,用手術(shù)剪剪碎成3mm×3mm左右的小(xiǎo)塊,加入150~200μl預冷的Lysis Buffer(含DTT),用玻璃勻漿器(qì)上(shàng)下(xià)手動勻漿15次,注意低(dī)溫操作。 b)将組織勻漿液轉移到(dào)1.5ml預冷的離心管,10,000rpm,4℃離心5min。 c)小(xiǎo)心吸取上(shàng)清(含裂解釋放(fàng)的蛋白(bái)質)轉移到(dào)新的EP管内,置于冰上(shàng)待用。 d)取少量上(shàng)清(1~2μl),用常規方法(Bradford法)測定蛋白(bái)濃度。 4.Caspase-8活性檢測
相(xiàng)關産品
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