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Caspase-3 Activity Assay Kit (Colorimetric) Caspase-3活性檢測試劑盒(比色法)
目錄号 MX3225-100T 售價 2890.00元
規格 100T 運輸溫度 冰袋運輸
其他名稱 保存溫度 -20℃保存
CAS号 N/A 有效期 1年(nián)
應用 訂購數量
産品簡介:

Caspase-3 Activity Assay Kit (Colorimetric)  

Caspase-3活性檢測試劑盒(比色法)


産品信息

産品名稱

産品編号

規格

價格(元)

Caspase-3活性檢測試劑盒(比色法)

MX3225-20T

20T

880

Caspase-3活性檢測試劑盒(比色法)

MX3225-100T

100T

2890


産品描述

Caspases(Cysteine-requiringAspartate Proteases)是一(yī)個(gè)高(gāo)度保守的半胱氨酸蛋白(bái)酶家族,特異性識别底物(wù)中的天冬氨酸殘基,在介導細胞凋亡的過程中發揮著(zhe)非常重要的作用。Caspases以潛在酶原的形式表達,通(tōng)過自(zì)發蛋白(bái)分解機(jī)制或經其他蛋白(bái)酶(通(tōng)常是其他caspases)加工(gōng)處理的方式被活化。人caspases可細分為(wèi)三大功能(néng)組:細胞因子活化(caspase-1,-4,-5和-13),凋亡啓動(caspase-2,-8,-9和-10)和凋亡執行(caspase-3,-6和-7)。

Caspase-2(Caspase 2),也稱為(wèi)Nedd2、ICH-1,含核定位所依賴的長(cháng)前肽結構域的一(yī)類caspase。一(yī)旦凋亡通(tōng)路(lù)被激活,caspase酶原在Asp316位上(shàng)被切割生(shēng)成一(yī)個(gè)14kDa片段和一(yī)個(gè)32kDa的前肽結構域/大亞基。接下(xià)來在Asp152和Asp330被切割,進一(yī)步生(shēng)成18kDa大亞基和12kDa小(xiǎo)片段。Caspase-2是應對基因毒性應激或有絲分裂障礙的核凋亡反應物(wù)。一(yī)旦招募生(shēng)成含p53誘導死亡結構域蛋白(bái)-PIDD的複合物(wù),caspase 2被激活。因此,Caspase-2被認為(wèi)是核啓動caspase,并且在下(xià)遊的凋亡途徑中需要激活caspase-9和caspase-3。

Caspase-3活性檢測試劑盒(比色法)(Caspase-3 Activity Assay Kit, Colorimetric or Caspase-3 Colorimetric Assay Kit)以偶聯上(shàng)發色基團pNA的caspase-3序列特異性的多(duō)肽為(wèi)底物(wù)。當底物(wù)被caspase-3剪切後,發色基團被釋放(fàng)出來,進而用酶标儀或分光(guāng)光(guāng)度計來測定其吸光(guāng)值(λ=405nm或400nm)。通(tōng)過計算(suàn)OD凋亡誘導組/OD陰性對照(zhào)組的比值來确定凋亡誘導組caspase-3的活化程度。

本品适用于培養細胞以及新鮮組織的caspase-3活性檢測。


産品包裝

編号

組分名稱

保存方法

貨号(規格)

MX3225-20T

MX3225-100T

MX3225-A

Lysis Buffer裂解緩沖液

2-8℃

5ml

20ml

MX3225-B

2× Reaction Buffer 2×反應緩沖液

2-8℃

1ml

5ml

MX3225-C

Caspase-3 Substrate Caspase-3底物(wù)

-20℃避光(guāng)

100μl

500μl

MX3225-D

0.1M DTT

-20℃避光(guāng)

60μl

250μl


保存與運輸方法

保存:-20℃保存,1年(nián)有效。開(kāi)盒後置Lysis Buffer和2× Reaction Buffer于2-8℃保存。Caspase-3 Substrate和0.1M DTT需要避光(guāng)凍存。

運輸:冰袋運輸。


注意事(shì)項

1) Caspase-3 Substrate需避光(guāng)保存和使用。

2) 某些凋亡誘導劑誘導的凋亡可能(néng)通(tōng)過caspase-3非依賴的方式進行,此種情況使用本品檢測的caspase-3活性無明顯變化,則,需要考慮凋亡機(jī)制中的其他信号通(tōng)路(lù)。

3) 起始細胞數量需達3~5×106個(gè)或新鮮組織量達50~100mg,以保證達到(dào)測定所需的100~200μg蛋白(bái)量。Caspase-3的活性與細胞裂解後的蛋白(bái)含量有關,如測定的OD值偏低(dī),可通(tōng)過增加細胞數量或組織量的方法來提高(gāo)蛋白(bái)量。

4) 優先選擇測定λ=405nm的吸光(guāng)值;如有困難,再測定λ=400nm的吸光(guāng)值。

5) 為(wèi)了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

使用方法


1.需要的其他試劑和材料

儀器(qì):低(dī)溫高(gāo)速離心機(jī)、酶标儀或分光(guāng)光(guāng)度計(100μl的比色皿)(λ=405nm或400nm)、微量移液器(qì)、玻璃勻漿器(qì)(組織樣本)

耗材:1.5ml微量離心管、96孔酶标闆(透明)或100μl的比色皿

試劑:PBS、蛋白(bái)定量試劑(比如:Bradford法蛋白(bái)濃度測定試劑盒)


2.試劑準備

2.1 Lysis Buffer(含DTT)

于實驗前,按每50μl Lysis Buffer 加入0.5μl DTT的比例準備足量的裂解工(gōng)作液,置于4℃或冰上(shàng)待用。

2.2 2×Reaction Buffer(含DTT)

于使用前,按每50μl 2×Reaction Buffer 加入0.5μl DTT的比例準備足量的反應工(gōng)作液。


3.樣本準備

3.1 細胞裂解

a)用合适方法誘導細胞凋亡,同時設立陰性對照(zhào)組(不加誘導劑),收集3~5×106個(gè)細胞。

b)PBS洗滌細胞2次(2000rpm,離心5min),盡量吸盡PBS上(shàng)清。

c)往離心的沉澱細胞中加入15~200μl預冷的Lysis Buffer(含DTT),吹打混勻。

d)置冰上(shàng)裂解20~60min,其間渦旋振蕩3~4次,每次10s;或凍融2~3次。

e)4℃,10,000rpm離心1min。

f)小(xiǎo)心吸取上(shàng)清(含裂解釋放(fàng)的蛋白(bái)質)轉移到(dào)新的EP管内,置于冰上(shàng)待用。

g)取少量上(shàng)清(1~2μl),用常規方法(Bradford法)測定蛋白(bái)濃度。

3.2 組織裂解

a)取50~100mg組織置于培養皿内,用手術(shù)剪剪碎成3mm×3mm左右的小(xiǎo)塊,加入150~200μl預冷的Lysis Buffer(含DTT),用玻璃勻漿器(qì)上(shàng)下(xià)手動勻漿15次,注意低(dī)溫操作。

b)将組織勻漿液轉移到(dào)1.5ml預冷的離心管,10,000rpm,4℃離心5min。

c)小(xiǎo)心吸取上(shàng)清(含裂解釋放(fàng)的蛋白(bái)質)轉移到(dào)新的EP管内,置于冰上(shàng)待用。

d)取少量上(shàng)清(1~2μl),用常規方法(Bradford法)測定蛋白(bái)濃度。

4.Caspase-3活性檢測

 

相(xiàng)關産品

貨号

名稱

規格

MX3223-20T

Caspase-1活性檢測試劑盒(比色法)

20T            

MX3224-20T

Caspase-2活性檢測試劑盒(比色法)

20T

MX3225-20T

Caspase-3活性檢測試劑盒(比色法)

20T

MX3226-20T

Caspase-4活性檢測試劑盒(比色法)

20T

MX3227-20T

Caspase-6活性檢測試劑盒(比色法)

20T

MX3228-20T

Caspase-8活性檢測試劑盒(比色法)

20T

MX3229-20T

Caspase-9活性檢測試劑盒(比色法)

20T

MX3230-20T

Caspase 2活性檢測試劑盒(熒光(guāng)法)

20T

MX3231-20T

Caspase-3活性檢測試劑盒(熒光(guāng)法)

20T

MX3232-20T

Caspase-6活性檢測試劑盒(熒光(guāng)法)

20T

MX3233-20T

Caspase-8活性檢測試劑盒(熒光(guāng)法)

20T

MX3234-20T

Caspase-9活性檢測試劑盒(熒光(guāng)法)

20T

 

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