Plant Protoplast Transformation Kit (PEG-Mediated)  

植物(wù)原生(shēng)質體轉化試劑盒（PEG法）

産品關鍵詞：

Plant Protoplast 植物(wù)原生(shēng)質體；PEG-mediated protoplast transformation 聚乙二醇介導的原生(shēng)質體轉化；Yakult Honsha；Cellulase R-10纖維素酶R-10；Macerozyme R-10離析酶R-10；二乙酸熒光(guāng)素(FDA) 原生(shēng)質體活力檢測；

産品信息

【溫馨提示】：見(jiàn)我司（MKBio）整理的植物(wù)細胞壁降解酶/消化酶産品專題。

【溫馨提示】：MX7383僅含原生(shēng)質體轉化所需的試劑，若需原生(shēng)質體制備的話，請選擇MX7381或MX7382。

産品描述

原生(shēng)質體（Protoplast）是指植物(wù)細胞去掉細胞壁後的裸露部分，體外培養條件(jiàn)下(xià)，具有以下(xià)功能(néng)：1）具全能(néng)型，可再生(shēng)細胞壁，進行連續的細胞分裂且能(néng)再生(shēng)成完整植株的能(néng)力；2）具攝取外源大分子、細胞器(qì)，以及細菌、病毒的能(néng)力，從(cóng)而原生(shēng)質體是進行遺傳操作，基因轉移的良好材料；3）通(tōng)過同種和異種植物(wù)的原生(shēng)質體融合，可産生(shēng)異核體，實現體細胞雜(zá)交，從(cóng)而培育出具有抗病原或更高(gāo)産量的新品種。

原生(shēng)質體（Protoplast）的制備最主流的技(jì)術(shù)是酶解法，因其具有消化溫柔，操作簡單，且良好維持原生(shēng)質體完整性的特點。工(gōng)作原理是根據植物(wù)細胞壁的結構特征選擇合适的酶進行處理，植物(wù)細胞壁主要由多(duō)糖（纖維素、半纖維素、果膠等）以及少量的蛋白(bái)和脂質構成。因此，通(tōng)過使用纖維素酶、離析酶、半纖維素酶、果膠酶等複合酶來降解細胞壁，即可得到(dào)原生(shēng)質體。

原生(shēng)質體（Protoplast）的轉化方法很多(duō)，主要有PEG介導轉化法、電(diàn)擊穿孔轉化法、脂質體介導轉化法、農杆菌共培養轉化法等。本試劑盒利用的是PEG介導的原生(shēng)質體轉化法，利用PEG短時間内對原生(shēng)質體産生(shēng)的沖擊效應，促使質粒DNA、RNA或蛋白(bái)質進入原生(shēng)質體，經轉化後的原生(shēng)質體培養一(yī)段時間後，可用于檢測外源基因的表達或基因編輯效果等研究。本試劑盒操作簡單和便捷，含原生(shēng)質體轉化需要的試劑，按照(zhào)每次轉化100μl原生(shēng)質體溶液，可做至少40次轉化。

試劑盒組分

保存與運輸方法

保存：-20℃保存，1年(nián)有效。 

運輸：室溫運輸。

注意事(shì)項

為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

使用方法

一(yī)、 需要準備材料

二、 原生(shēng)質體轉化

2.1按照(zhào)以下(xià)表1，根據實際樣品量配制所需的即用型轉化溶液D，需在轉化開(kāi)始前至少1h配制轉化溶液，以确保轉化試劑能(néng)充分的溶解。轉化溶液建議配制當天使用。配制好的轉化溶液于4℃保存3-5天内會(huì)維持相(xiàng)對較好的轉化效率，但與現配的轉化溶液相(xiàng)比，轉化效率會(huì)有一(yī)定程度的下(xià)降。

2.2取10μl質粒DNA（10-20μg，濃度為(wèi)1-2μg/μl）于1.5ml離心管。

【注①】：質粒大小(xiǎo)建議在5-10kb，質粒濃度建議在1-2μg/μl。原生(shēng)質體轉化對質粒的純度要求較高(gāo)，盡量使用高(gāo)純質粒。多(duō)個(gè)質粒同時轉化時的體積和總質量保持不變。多(duō)個(gè)質粒轉化時，每種質粒的用量比例，根據實際情況自(zì)行調整。

2.3 加入100μl原生(shēng)質體溶液（原生(shēng)質體密度為(wèi)2×105個(gè)/ml，約2萬個(gè)原生(shēng)質體），輕柔混勻。

2.4 加入等體積（110μl）新鮮配制的即用型轉化溶液D，輕柔完全混勻，室溫25℃孵育5-15min，間歇輕柔混勻。

【注①】：通(tōng)常孵育5min足夠，但需要根據實際體系來優化調整，最長(cháng)孵育15min。

2.5 加入2倍體積（440μl）溶液B，輕柔完全混勻，終止轉化過程。

2.6 于100×g，室溫離心1-2min，吸掉上(shàng)清。

【注①】：由于轉化後的溶液非常粘稠，加入溶液B後離心1min通(tōng)常可以使得原生(shēng)質體聚集在管底，但是，使用某些突變體時為(wèi)了減少原生(shēng)質體損失，可以延長(cháng)離心時間到(dào)2min。

2.7 加入500μl溶液B輕輕重懸原生(shēng)質體，于100×g，室溫離心1min，吸掉上(shàng)清。此步目的是為(wèi)了充分去除轉化液内殘留組分，避免後續可能(néng)産生(shēng)的負面影響。

2.8 将沉澱重懸于1ml溶液E中，輕柔混勻。

三、 原生(shēng)質體培養和收集

3.1 将離心管水(shuǐ)平放(fàng)置，于25℃弱光(guāng)培養2-16h。

【注①】：根據特定實驗确定孵育時間。RNA分析一(yī)般孵育2-6h；酶活性分析和蛋白(bái)标記一(yī)般孵育2-16h。基因編輯效果可能(néng)在24h後被檢測到(dào)。

3.2 【可選】于100×g，室溫離心2min收集原生(shēng)質體，去掉大部分上(shàng)清。

3.3 【可選】原生(shēng)質體沉澱重懸于剩餘溶液中，-80℃保存。

相(xiàng)關産品

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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