SHuffle T7 Chemically Competent Cell

大腸杆菌化學感受态細胞

産品标簽

GT115化學感受态細胞；TOP10；DH10B；XL1-Blue；pCpG-free質粒；pCpG-mcs；pCpG-LacZ；

産品訂購： 更大包裝或産品技(jì)術(shù)問題，請來電(diàn)/在線咨詢，電(diàn)話：021-54736159 。網站：www.maokangbio.com。

菌株描述

SHuffle T7菌株是一(yī)款基因工(gōng)程改造的K12衍生(shēng)菌株，特别設計改進含二硫鍵蛋白(bái)在細胞質内的表達，适合于T7啓動子驅動的蛋白(bái)表達。

該菌株染色體中整合一(yī)個(gè)拷貝的二硫鍵異構酶基因—DsbC，促進錯(cuò)誤氧化的蛋白(bái)轉化為(wèi)正确形式。另外，細胞質中的DsbC也是一(yī)個(gè)分子伴侶，能(néng)協助不含二硫鍵蛋白(bái)的正确折疊。SHuffle T7菌株染色體中整合一(yī)個(gè)拷貝的T7 RNAP基因，可以表達噬菌體T7 TNA聚合酶，從(cóng)而适用于T7啓動子誘導的蛋白(bái)表達。LacIq基因的嚴格控制表達允許毒性基因得以克隆。SHuffle T7菌株具抵抗噬菌體T1（fhuA2）感染的特點，具鏈黴素和壯觀黴素抗性。

SHuffle T7菌株基因型：F´ lac, pro, lacIq / Δ(ara-leu)7697 araD139 fhuA2 lacZ::T7 gene1 Δ(phoA)PvuII phoR ahpC* galE (or U) galK λatt::pNEB3-r1-cDsbC (SpecR, lacIq) ΔtrxB rpsL150(StrR) Δgor Δ(malF)3

産品描述

本品是大腸杆菌SHuffle T7菌株經特殊工(gōng)藝制作所得的感受态細胞，可用于DNA的熱擊轉化。經pUC19載體檢測轉化效率可達>1×108cfu/μg DNA。且在-80℃能(néng)穩定保存幾個(gè)月(yuè)轉化效率不發生(shēng)改變。

産品包裝

保存與運輸條件(jiàn)：

保存：-80℃保存，六個(gè)月(yuè)有效。

運輸：幹冰運輸。

注意事(shì)項

1） 感受态細胞必須用幹冰運輸。感受态細胞應在-80℃保存，不可反複凍融且放(fàng)置時間過長(cháng)，否則會(huì)減低(dī)感受态細胞的轉化效率。

2） 最好在冰上(shàng)融化感受态細胞。

3） 進行轉化操作時，需在相(xiàng)應溫度及無菌條件(jiàn)下(xià)進行。

4） 為(wèi)防止轉化實驗不成功，可保留部分連接反應液以重新轉化，将損失降到(dào)最低(dī)。

5） 産品包裝内含載體pUC19 DNA(10pg/μl)，供對照(zhào)實驗用。

6） SHuffle T7菌株具鏈黴素、壯觀黴素抗性，不可用于具鏈黴素、壯觀黴素抗性質粒的轉化。

7） 為(wèi)獲得需要量的蛋白(bái)，最佳誘導時間、溫度、IPTG濃度（0.1~2mM）都需進行優化。

8） 為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

使用方法【所有操作均在無菌條件(jiàn)的标準下(xià)進行】

1） 從(cóng)-80℃冰箱取出取感受态細胞，迅速置于冰浴中，5min後待菌塊融化，加入目的質粒，用手輕彈管底輕輕混勻（避免用槍吹打），冰浴靜(jìng)置25min。

2） 42℃水(shuǐ)浴熱激45s，迅速将離心管轉移到(dào)冰浴中，冰上(shàng)靜(jìng)置2min。此過程不要搖動離心管。

3） 向每個(gè)離心管中加入700 μl無菌的LB培養基（不含抗生(shēng)素），混勻後置于37℃搖床，200 rpm振蕩培養60min，目的使質粒上(shàng)相(xiàng)關的抗性标記基因表達，使菌體複蘇。

4） 低(dī)速離心收菌（比如5000rpm，1min），留取50-100μl左右上(shàng)清，用槍輕輕吹打重懸菌塊，之後加到(dào)含相(xiàng)應抗生(shēng)素的LB固體瓊脂培養基上(shàng)，用無菌的塗布棒将細胞均勻塗開(kāi)，将平闆置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，之後倒置放(fàng)于37℃過夜培養。

【注意】：

a）塗布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多(duō)，可不用離心，直接取少量轉化産物(wù)塗布平闆；反之，若轉化的DNA總量較少，則通(tōng)過離心（5,000 rpm，1min）後吸除部分培養液，懸浮菌體後将其塗布于一(yī)個(gè)平闆中。

b）新制備的固體培養基不易塗幹，可将平闆正置于37℃直至液體被吸收後再倒置培養。

c）塗布剩餘的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以将剩下(xià)的菌液再塗布新培養基進行培養。

相(xiàng)關産品

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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