Alkaline Phosphatase(Calf Intestine), Molecular Biology Grade

小(xiǎo)牛腸堿性磷酸酶（分子生(shēng)物(wù)學級别）

産品信息

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産品内容

産品描述

堿性磷酸酶（Phosphatase, Alkaline，ALP，EC 3.1.3.1），是一(yī)種含兩個(gè)相(xiàng)同亞基的二聚體，也是一(yī)種約含12%碳水(shuǐ)化合物(wù)（6%己糖和6%其他中性糖）的糖蛋白(bái)，每個(gè)ALP分子含4個(gè)鋅離子和4個(gè)二硫鍵。鎂離子存在情況下(xià)，ALP可達到(dào)最高(gāo)酶活。AP能(néng)催化磷酸單酯水(shuǐ)解，比如對硝基苯酚磷酸鹽（pNPP）、磷酸苯酯、酚酞磷酸、α-甘油磷酸、β-甘油磷酸、2- 磷酸甘油酸、磷酸丙糖、葡萄糖-6-磷酸、葡萄糖-1-磷酸、果糖-6-磷酸、腺苷-5-磷酸、腺苷-3-磷酸、磷酸烯醇式丙酮酸和β-煙(yān)酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸等。

堿性磷酸酶（ALP）常用來偶聯抗體和其他蛋白(bái)，從(cóng)而滿足ELISA、WB和組織化學檢測上(shàng)的應用。通(tōng)常用來蛋白(bái)的去磷酸化實驗，比如酪蛋白(bái)和核酸等。當需要高(gāo)檢測靈敏度時也能(néng)用來蛋白(bái)标記。還(hái)可用在DNA或RNA的5′-末端去磷酸以防止自(zì)連。經堿性磷酸酶的去磷酸化作用後，DNA或RNA還(hái)可被放(fàng)射性标記磷酸鹽标記（通(tōng)過T4多(duō)核苷酸激酶）。

本品是由分子量為(wèi)50,000的單體組成的二聚體，活性形式為(wèi)含有Zn2+的糖蛋白(bái)的金屬酶。本品是酵母重組表達的小(xiǎo)牛腸（Calf Intestine）堿性磷酸酶，與大腸杆菌來源的酶相(xiàng)同，催化所有磷酸單酯的水(shuǐ)解，不能(néng)催化磷酸二酯以及磷酸三酯的水(shuǐ)解。達分子生(shēng)物(wù)學級别，适用于去除載體DNA片段的5′-末端的磷酸基團。

活性定義

在37℃，pH9.8反應條件(jiàn)，每min内水(shuǐ)解對硝基苯磷酸鹽(p-nitrophenyl phosphate, pNPP)生(shēng)成1 μmol對硝基苯酚(p-nitrophenol)所需的酶量定義為(wèi)1個(gè)活性單位(unit)。

保存與運輸方法

保存：-20℃凍存，1年(nián)穩定。

運輸：冰袋運輸。

注意事(shì)項

1） 本品最佳pH 8-10，最佳酶活受底物(wù)類型、底物(wù)濃度和離子濃度影響。本品正常保存穩定性很高(gāo)，在螯合劑存在條件(jiàn)下(xià)，經65℃,30min加熱處理，99%活性不可逆失活（反應條件(jiàn)不同可能(néng)會(huì)有例外）。建議失活處理時使用苯酚，可使其完全失活。

2） 為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

使用方法【DNA的去磷酸化，僅做參考】

1、在離心管内配制下(xià)列反應液：

2、37℃或50℃反應30min。也可以先在37℃反應15min，之後再50℃反應15min。

3、苯酚/氯仿/異戊醇（25:24:1）抽提2次；

4、氯仿/異戊醇（24:1）抽提；

5、添加2.5μl的3M NaCl（終濃度為(wèi)150mM）.

6、添加125μl的冰乙醇，在-20℃放(fàng)置30~60min，離心。

7、用200μl 70%冰乙醇洗滌DNA沉澱并幹燥。

8、用≤20μl的TE Buffer溶解沉澱。

相(xiàng)關産品

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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