Sulfo-NHS-Biotin (Sulfosuccinimidyl Biotin) 
磺基琥珀酰亞胺生(shēng)物(wù)素

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Sulfo-NHS-Biotin；Sulfo-NHS；NHS N-羟基琥珀酰亞胺； Sulfo-SMCC；異型雙功能(néng)交聯劑；NHS酯（胺基指向）；CAS NO：6066-82-6；CAS NO：119616-38-5；

産品信息

産品描述

磺基琥珀酰亞胺生(shēng)物(wù)素（Sulfosuccinimidyl Biotin, Sulfo-NHS-Biotin）适用于快速、有效的标記抗體、蛋白(bái)和其它含伯胺分子。Sulfo-NHS-Biotin具水(shuǐ)溶性、膜非滲透性兩大特征，特别适用于标記細胞表面蛋白(bái)。細胞表面生(shēng)物(wù)素化已成為(wèi)一(yī)種重要的工(gōng)具，用來研究受體和轉運體的表達和調控、區分細胞質膜蛋白(bái)和定位在細胞器(qì)膜上(shàng)的蛋白(bái)，以及極化上(shàng)皮細胞的膜蛋白(bái)分布，等等。由于Sulfo-NHS-Biotin容易溶于極性溶液，琥珀酰亞胺環上(shàng)的磺酸鈉基團使其帶電(diàn)荷從(cóng)而不能(néng)穿透細胞膜。隻要細胞維持完整性，則僅有暴露在細胞表面的伯胺才能(néng)與其反應，從(cóng)而将蛋白(bái)生(shēng)物(wù)素化。

水(shuǐ)不溶性版的Sulfo-NHS-Biotin是NHS-Biotin（Cat#：MM3705），是廣泛使用的生(shēng)物(wù)素化試劑，兩者的工(gōng)作原理相(xiàng)同，：在生(shēng)理至弱堿性緩沖液（pH 7-9）中，NHS-Biotin與伯胺（-NH2）反應形成穩定的酰胺鍵。蛋白(bái)（包括：抗體）通(tōng)常含幾種可作為(wèi)标記靶标的伯胺，包括賴氨酸殘基的側鏈和每條多(duō)肽的N末端。我司提供幾種不同的生(shēng)物(wù)素-NHS酯，具有不同的物(wù)理特性和臂長(cháng)，包括：NHS-LC-Biotin、Sulfo-NHS-LC-Biotin。

産品特性

保存與運輸方法

保存：-20℃密封幹燥保存，至少2年(nián)穩定。

運輸：冰袋運輸。

注意事(shì)項

1） 1 Sulfo-NHS-Biotin對濕度敏感，需置于-20℃密封幹燥保存。避免處理産品過程中受潮，務必開(kāi)蓋前将本品平衡至室溫。

2） 務必于使用前在溶解粉末，由于NHS酯官能(néng)團非常容易水(shuǐ)化，從(cóng)而失去反應性。因此，不要配制用來保存的儲存液，丢棄任何未用完的溶液。

3） 避免使用含伯胺的緩沖液（比如：Tris、甘氨酸），這些成分會(huì)競争性排擠目的反應。如有必要，通(tōng)過透析或脫鹽的方式來更換成不含伯胺的反應緩沖液比如：PBS。

4） 為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

操作步驟（溶液内生(shēng)物(wù)素化蛋白(bái)）

1. 計算(suàn)

生(shēng)物(wù)素标記率取決于蛋白(bái)上(shàng)氨基分布、蛋白(bái)濃度和試劑用量。與高(gāo)濃度蛋白(bái)參與的反應相(xiàng)比較，低(dī)濃度蛋白(bái)參與的反應需要更高(gāo)摩爾過量的生(shēng)物(wù)素試劑，以達到(dào)相(xiàng)同的标記水(shuǐ)平。使用20倍摩爾過量生(shēng)物(wù)素試劑來标記1-10mg/ml抗體（體積：0.5-2ml）的得率，是每個(gè)抗體上(shàng)标記4-6個(gè)生(shēng)物(wù)素基團。使用50倍摩爾過量生(shēng)物(wù)素試劑标記50-200μg抗體（0.2-0.7ml）的得率，是每個(gè)抗體上(shàng)标記1-3個(gè)生(shēng)物(wù)素基團。需調整Sulfo-NHS-Biotin與蛋白(bái)的摩爾比率來獲取理想的插入率。

A．計算(suàn)加入反應體系所需生(shēng)物(wù)素試劑（如：Sulfo-NHS-Biotin）的毫摩爾（millimoles）（20倍摩爾過量）

B．計算(suàn)加入反應體系得到(dào)10mM生(shēng)物(wù)素試劑（如：Sulfo-NHS-Biotin）所需的微升量（μl，microliters）

2. 生(shēng)物(wù)素标記反應

2.1 從(cóng)冰箱取出生(shēng)物(wù)素試劑（如：Sulfo-NHS-Biotin），開(kāi)蓋前平衡至室溫。

2.2 根據1計算(suàn)所得，準備溶于PBS的蛋白(bái)溶液。

2.3 使用前，配制10mM生(shēng)物(wù)素試劑（如：Sulfo-NHS-Biotin）。

2.4 加入适量體積的10mM生(shēng)物(wù)素試劑（如：Sulfo-NHS-Biotin）到(dào)蛋白(bái)溶液。

2.5 冰上(shàng)孵育2h或室溫孵育30min。

2.6 此時蛋白(bái)标記完成，溶液内雖有過量未反應和水(shuǐ)解的生(shēng)物(wù)素試劑，但通(tōng)常情況下(xià)，此時标記好的蛋白(bái)可以進行後續的ELISA或WB實驗。一(yī)旦确認好标記蛋白(bái)的功能(néng)，再通(tōng)過脫鹽或透析的方法來純化标記蛋白(bái)。

操作步驟（生(shēng)物(wù)素化細胞表面蛋白(bái)）

1. 用預冷PBS（pH 8.0）清洗細胞三次，以去除任何含胺培養基和分泌蛋白(bái)。

2. 用PBS（pH 8.0）重懸細胞使其濃度為(wèi)~25×106細胞/ml。

3. 按照(zhào)1ml細胞懸液加入1mg Sulfo-NHS-Biotin（得到(dào)~2mM生(shēng)物(wù)素試劑）。或，按照(zhào)1ml細胞懸液加入200μl 10mM生(shēng)物(wù)素試劑。

4. 室溫孵育30min。【注意】：4℃孵育可能(néng)減低(dī)生(shēng)物(wù)素試劑的内在化反應。

5. 用PBS（pH 8.0）+100mM甘氨酸清洗細胞三次以淬滅和去除過剩的生(shēng)物(wù)素試劑和副産物(wù)。

相(xiàng)關産品

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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