DRAQ7 (0.3mM) 遠(yuǎn)紅(hóng)外DNA染料

産品标簽

DRAQ7；DRAQ5；Anthraquinone dye 蒽醌染料；DNA染料；7-AAD；碘化丙啶（PI）；細胞活力分析；TMRM 線粒體膜電(diàn)位探針；

産品信息

産品描述

DRAQ7是一(yī)種不具細胞通(tōng)透性的遠(yuǎn)紅(hóng)外DNA染料，僅對死細胞和透化細胞的核染色，能(néng)與其它常見(jiàn)的标記染料（比如：GFP或FITC）聯合使用。DRAQ7是一(yī)種理想工(gōng)具用于研究死細胞或膜受損細胞，因其不用進入完整膜結構的活細胞。DRAQ7是碘化丙啶（PI）和7-AAD的理想替代品，因其不能(néng)被紫外激發，且與PE/PE同源物(wù)沒有發射光(guāng)重疊。

DRAQ7的關鍵特征包括：1）快速染色死細胞或透化細胞的dsDNA/核；2）低(dī)光(guāng)漂白(bái)；3）适用于絕大多(duō)數細胞，真核和原核來源：哺乳動物(wù)、細菌、寄生(shēng)蟲、植物(wù)等；4）長(cháng)期培養無毒性；5）能(néng)與活細胞染料結合使用；6）流式細胞檢測中與常見(jiàn)的FITC/GFP+PE結合實驗無需做熒光(guāng)補償；7）不用清洗或RNase處理；

染料特性

1）   外觀：液體（0.3mM）

2）   激發波長(cháng)：最理想633和647nm處（Eλmax= 599/644nm）； 次理想488，514，568nm處（僅适用于流式分析）

3）   發射波長(cháng)（取決于儀器(qì)）：665nm至紅(hóng)外（Emλmax= 678nm/697nm，摻入 dsDNA）

          與可見(jiàn)光(guāng)區比如：GFP和FITC，最小(xiǎo)重疊；發射濾片可能(néng)包括：695L, 715LP 或780 LP

3）與紫外/可見(jiàn)光(guāng)熒光(guāng)素的多(duō)波長(cháng)成像：與DNA結合後沒有熒光(guāng)增強；低(dī)光(guāng)漂白(bái)效應；兼容于流式細胞儀、激光(guāng)掃描細胞儀和共聚焦顯微鏡的光(guāng)學；以及基于燈泡的熒光(guāng)顯微鏡。

保存與運輸方法

保存：2-8°C避光(guāng)保存，2年(nián)有效。不可凍存！

運輸：室溫運輸。

注意事(shì)項

1）DRAQ7是Biostatus Limited的商标名。

2）熒光(guāng)染料都存在淬滅的問題，保存和操作過程中注意避光(guāng)。

3）為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

染色步驟（懸浮細胞的活力染色）

1）對于每個(gè)樣本，用PBS重懸細胞使其密度約為(wèi)5×105細胞/ml。疊氮鈉影響DRAQ7染色，建議用PBS（不含鈣鎂或疊氮鈉）或細胞培養基（不含疊氮鈉）來染色。

2）加入适量DRAQ7（0.3mM）到(dào)所需濃度。推薦做濃度滴定來确定最佳的工(gōng)作濃度。用于流式細胞儀和顯微成像檢測，通(tōng)常1:100的稀釋倍數（3µM）能(néng)獲得良好的染色結果。

3）室溫避光(guāng)孵育10-15min。不需清洗。

4）流式細胞儀分析。對于流式分析，當使用藍色激光(guāng)器(qì)激發，染料用PerCP-Cy5.5或PerCP-eFluor 710的濾片設置來觀察；當使用紅(hóng)色激光(guāng)器(qì)激發，染料用Cy5的BP或LP濾片設置來觀察。另，當進行熒光(guāng)顯微鏡分析，最好用黃-紅(hóng)光(guāng)激發。用比如：695L, 715LP 或780 LP的遠(yuǎn)紅(hóng)長(cháng)通(tōng)濾片來觀察。

延伸閱讀(dú)（DRAQ7的動力學活力分析）

文獻來源：Wlodkowic D, Akagi J, Dobrucki J, et al. Kinetic viability assays using DRAQ7 probe. Curr Protoc Cytom. 2013;Chapter 9:10.1002/0471142956.cy0941s65. doi:10.1002/0471142956.cy0941s65

實驗1）DRAQ7實時染色（Real-time DRAQ7 staining）

①在合适的容器(qì)比如微量滴定闆或細胞培養瓶内接種或分散細胞到(dào)培養基；

②加10μl DRAQ7儲存液（濃度：300μM）到(dào)每1000μl細胞懸液（染料終濃度為(wèi)3μM）；

③輕輕混勻使染料均勻分散在溶液内；

④在含DRAQ7的情況下(xià)使細胞生(shēng)長(cháng)高(gāo)達5天（37℃，5% CO2）；

⑤定期收集染色樣本用于流式分析；【細胞體積至少符合流式細胞儀分析要求的最低(dī)樣本體積100-150μl】；

⑥不用清洗直接用流式細胞儀分析，用488nm激發器(qì)或633-647nm激發器(qì)，發射波長(cháng)>660 nm。

關于DRAQ7的重要信息：DRAQ7培養高(gāo)達5天對人細胞系無毒性，在高(gāo)達20μM DRAQ7的體系内培養細胞，對細胞增殖、細胞周期、活力無明顯幹擾，且對藥物(wù)比如抗腫瘤化合物(wù)或凋亡誘導劑沒有反應。

結果呈現：

Figure 1 Assessment of live, early apoptotic and late apoptotic/necrotic cells based on stainability with plasma membrane permeability marker DRAQ7. Analysis was based on real-time labeling of THP-1 cells with 3 μM of DRAQ7. Bivariate dot plots DRAQ7 vs. forward scatter (FS) enable discrimination of live (DRAQ7−; green gate), early apoptotic (DRAQ7dim; blue gate) and late apoptotic/necrotic (DRAQ7+; red gate) subpopulations. DRAQ7 probe was excited using 633 nm laser and logarithmically amplified fluorescence signals were collected using 660 nm long-pass filter.

實驗2）DRAQ7和線粒體膜電(diàn)位敏感探針TMRM雙重實時評估細胞死亡（Two color real-time assay with DRAQ7 and TMRM）

①在合适的容器(qì)比如微量滴定闆或細胞培養瓶内接種或分散細胞到(dào)培養基；

②加10μl DRAQ7儲存液（濃度：300μM）到(dào)每1000μl細胞懸液（染料終濃度為(wèi)3μM）；

③加15μl TMRM工(gōng)作液（濃度：10μM）到(dào)每1000μl細胞懸液（染料終濃度為(wèi)150nM）；

④輕輕混勻使染料均勻分散在溶液内；

⑤在含DRAQ7和TMRM兩種染料的情況下(xià)使細胞生(shēng)長(cháng)高(gāo)達5天（37℃，5% CO2）；

⑥定期收集染色樣本用于流式分析；【細胞體積至少符合流式細胞儀分析要求的最低(dī)樣本體積100-150μl】；

⑦不用清洗直接用流式細胞儀分析，用488nm激發器(qì)和633-647nm激發器(qì)，發射波長(cháng)分别搜集575nm（TMRM）和>660 nm（DRAQ7）的信号。

重要信息：DRAQ7和TMRM兩種染料都能(néng)被488nm激發器(qì)激發。兩者相(xiàng)鄰通(tōng)道間的光(guāng)譜重疊很小(xiǎo)，如兩者都用488nm激發器(qì)來激發，可能(néng)需做一(yī)些小(xiǎo)補償調整。DRAQ7熒光(guāng)能(néng)用标準APC 660nm寬帶濾片觀察，當用633nm激發器(qì)來激發，避免使用任何熒光(guāng)補償。調整對數放(fàng)大尺度來區分活細胞（明亮的TMRM+/DRAQ7−）、凋亡細胞（TMRMlow/DRAQ7−）、具受損質膜的晚期凋亡/壞死細胞（TMRMlow/DRAQ7+）。在一(yī)些細胞體系，可能(néng)有必要優化DRAQ7和TMRM濃度，以及PMT電(diàn)壓在不同的細胞時間中獲得最大的分辨率。

Figure 2 Discrimination of viable, apoptotic and late apoptotic/necrotic cells based on Δψm marker

 tetramethylrhodamine methyl ester (TMRM) and plasma membrane permeability marker DRAQ7. Analysis was based on real-time labeling of THP-1 cells with 3 μM of DRAQ7 and 150 nm of TMRM. Bivariate dot plots DRAQ7 vs. TMRM enable discrimination of live (TMRM+/DRAQ7−; green gate), early apoptotic (TMRMlow/DRAQ7dim; blue gate) and late apoptotic/necrotic (TMRMlow/DRAQ7+; red gate) subpopulations. DRAQ7 probe was excited using 633 nm laser and logarithmically amplified fluorescence signals were collected using 660 nm long-pass filter. TMRM was excited using 488 nm laser and logarithmically amplified fluorescence signals were collected using 575 nm long-pass filter. Debris signals were excluded electronically by setting the proper low threshold.

相(xiàng)關産品

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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