Reduced Glutathione Assay Kit

還(hái)原型谷胱甘肽（GSH）檢測試劑盒

産品信息

産品描述

谷胱甘肽（Glutathione, Glutathione）是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸組成的一(yī)種三肽。是最小(xiǎo)的細胞内蛋白(bái)巯基分子，能(néng)夠預防活性氧比如自(zì)由基和過氧化物(wù)引起的細胞損傷。谷胱甘肽以還(hái)原型（GSH）和氧化型（GSSG）兩種狀态存在。還(hái)原型谷胱甘肽（GSH）是主要的組織抗氧化劑，為(wèi)谷胱甘肽過氧化物(wù)酶（GPx）催化脂質氫過氧化物(wù)還(hái)原生(shēng)成醇化合物(wù)和過氧化氫生(shēng)成水(shuǐ)提供還(hái)原當量物(wù)。谷胱甘肽過氧化物(wù)酶（GPx）催化反應中，兩個(gè)GSH之間二硫鍵的形成使生(shēng)成氧化型谷胱甘肽（GSSG）。而谷胱甘肽還(hái)原酶（GR）同時在β-NADPH₂的氧化下(xià)将GSSG再循環生(shēng)成GSH。當細胞暴露于逐漸提高(gāo)的氧化應激下(xià)，GSSG累積，引起GSSG/GSH水(shuǐ)平增加。GSSG/GSH增加程度可用作氧化應激水(shuǐ)平的指示劑。因此，監測生(shēng)物(wù)樣本内GSH和GSSG的水(shuǐ)平至關重要，能(néng)夠用于評估細胞和組織應對氧化應激和自(zì)由基介導的細胞損傷上(shàng)的氧化還(hái)原和解毒狀态。

本還(hái)原型谷胱甘肽檢測試劑盒（Reduced Glutathione Assay Kit, GSH Assay Kit）是一(yī)款簡單便捷的還(hái)原型谷胱甘肽測定試劑盒，檢測原理是：待測樣本内的還(hái)原型谷胱甘肽（GSH）與二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）反應，生(shēng)成穩定的黃色的TNB和GSSG，通(tōng)過酶标儀測定410nm處的吸光(guāng)度，并且與相(xiàng)應處理的GSH标準做比較，得到(dào)樣品中的GSH含量。本試劑盒适用于測定血漿、血清、動植物(wù)組織、細胞等樣本内的GSH含量。

試劑盒組分

保存與運輸方法

保存：-20℃保存，6個(gè)月(yuè)穩定。推薦根據各組分的保存方法歸位保存。

運輸：冰袋運輸。

注意事(shì)項

為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

使用方法

1. 試劑準備

1.1 配制 GSH 标準儲存液

将低(dī)溫保存的還(hái)原型谷胱甘肽标準（GSH Standard）回溫至室溫。往10mg 還(hái)原型谷胱甘肽标準加入3.25ml ddH₂O，溶解并混勻，即得到(dào)：還(hái)原型 GSH 标準儲存液（10mM）。一(yī)部分立即使用，剩下(xià)的請根據單次用量适當分裝後，-20℃保存，避免反複凍融。

1.2 配制 DTNB儲存液

往10mg DTNB 中加入1ml DMSO，溶解并混勻，即得到(dào)：DTNB 儲存液（10mg/ml）。一(yī)部分立即使用，剩下(xià)的請根據單次用量适當分裝後，-20℃保存，避免反複凍融。

1.3 配制 GSH檢測工(gōng)作液：按下(xià)表配制本工(gōng)作液。

1.4 配制蛋白(bái)沉澱工(gōng)作液

往2.5g 蛋白(bái)沉澱劑中加入 50ml ddH₂O，配制成 50ml 5%的水(shuǐ)溶液，即得到(dào)：蛋白(bái)沉澱工(gōng)作液，置于4℃保存。

1.5 配制标準品

把還(hái)原型 GSH 标準儲存液（10mM）用蛋白(bái)沉澱工(gōng)作液稀釋成 50μM 标準溶液，然後依次稀釋成 25、 15、 10、5、2μM GSH 溶液，取 50、 25、 15、 10、 5、 2μM GSH 标準溶液 6 個(gè)點做标準曲線。【注意：由于 GSH 标準在蛋白(bái)沉澱工(gōng)作液中不是很穩定，用蛋白(bái)沉澱工(gōng)作液配制的 GSH 溶液必須新鮮配制，不可凍存後再使用。】

1.6配制 NADPH 工(gōng)作液

往10mg NADPH 中加入 1ml ddH₂O，溶解并混勻，即得到(dào)：NADPH 儲存液（10mg/ml）。一(yī)部分立即使用，剩下(xià)的請根據單次用量适當分裝後，-20℃保存，避免反複凍融。按 0.1ml NADPH 儲存液（10mg/ml）加入 8.23ml GSH assay buffer的比例加量，充分混勻，即得到(dào)：NADPH 工(gōng)作液（0.12mg/ml）。

2. 樣本準備

2.1 紅(hóng)細胞或血漿樣品

取新鮮血液，600g離心10min，沉澱為(wèi)紅(hóng)細胞，上(shàng)清為(wèi)血漿。對于紅(hóng)細胞，用 PBS 洗滌兩次，取約 50μl 紅(hóng)細胞沉澱或血漿，加入50μl 蛋白(bái)沉澱工(gōng)作液，充分渦旋振勻。4℃或冰浴放(fàng)置10min， 4℃ 10000g 離心10min，取上(shàng)清，用于GSH測定，樣品需暫時4℃保存備用，不立即測定的樣品可以-70℃保存，但不宜超過10天。對于處理好的紅(hóng)細胞樣品最後需用蛋白(bái)沉澱工(gōng)作液稀釋 10倍後再進行後續的測定，而對于血漿樣品，應直接取10μl 進行測定。

2.2 動植物(wù)組織樣品

取組織用液氮速凍，迅速研磨，按每40mg加入100μl 蛋白(bái)沉澱工(gōng)作液（亦可不用液氮，而是直接加入蛋白(bái)沉澱工(gōng)作液至組織後勻漿或研磨），充分渦旋振勻，再加入300μl 蛋白(bái)沉澱工(gōng)作液，用勻漿器(qì)充分勻漿。4℃孵育 10min，4℃ 10000g離心10min，取上(shàng)清，用于GSH測定。樣品需暫時 4℃保存備用，不立即測定的樣品可以-70℃保存，但不宜超過10 天。對于處理好的組織樣品通(tōng)常需用蛋白(bái)沉澱工(gōng)作液進行适當稀釋後再進行測定，稀釋倍數通(tōng)常為(wèi) 5-20倍。