| 目錄号 | MX2216-1KIT | 售價 | 2950.00元 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 規格 | 1kit | 運輸溫度 | 室溫運輸 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 其他名稱 | 保存溫度 | 4℃保存 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| CAS号 | N/A | 有效期 | 1年(nián) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 應用 | 訂購數量 |
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産品簡介: CPFect siRNA/miRNA Transfection Kit CPFect小(xiǎo)分子RNA轉染試劑盒 産品信息
産品描述 CPFect小(xiǎo)分子RNA轉染試劑盒（CPFect siRNA/miRNA Transfection Kit）是一(yī)款專門(mén)開(kāi)發用于小(xiǎo)分子RNA（比如siRNA、miRNA）的轉染試劑盒，含有轉染所需的轉染試劑，以及轉染緩沖液。本品具極好的生(shēng)物(wù)相(xiàng)容性、轉染效率高(gāo)、細胞毒性小(xiǎo)。轉染時無需進行培養基更換操作，特别适合各種高(gāo)通(tōng)量細胞篩選實驗、方便、快速、高(gāo)效。 試劑盒組分
保存與運輸方法保存：+4℃保存，1年(nián)有效。 運輸：室溫運輸。 注意事(shì)項 1）使用高(gāo)純的DNA或RNA有助于獲得較高(gāo)的轉染效率，内毒素是影響轉染效率高(gāo)低(dī)的重要因素。 2）轉染過程中不要添加抗生(shēng)素到(dào)培養基，否則會(huì)導緻細胞死亡。 3）CPFect siRNA/miRNA Transfection Reagent（MX2216-A）應該在4℃保存，不可凍存。 4）為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。 使用方法 一(yī)、準備工(gōng)作 1.1 從(cóng)冰箱内取出 CPFect siRNA/miRNA Transfection Reagent（MX2216-A）後，在漩渦振蕩器(qì)中充分振蕩後，室溫放(fàng)置，使之恢複到(dào)室溫後使用。 1.2 從(cóng)冰箱内取出10× CPFect Transfection Buffer（MX2216-B）後，取适量按照(zhào)1：9的比例用PBS稀釋到(dào)1×，混勻後待用。 二、轉染方法（以24孔闆内轉染siRNA為(wèi)例） 2.1 接種細胞 a. 貼壁細胞（以HeLa細胞為(wèi)例）：轉染前一(yī)天，接種1×105~5×105個(gè)細胞至含有适量完全培養基的24孔闆培養孔中，使轉染時的細胞密度能(néng)夠達到(dào)30~50%。 b. 懸浮細胞（以THP-1細胞為(wèi)例）：接種1×105~5×105個(gè)細胞至含有适量完全培養基的24孔闆培養孔中。 【注意】： 1）不同細胞生(shēng)長(cháng)速度不同，接種細胞的數量，細胞密度需要依據細胞類型、培養時間、實驗目的而定； 2）每孔接種的細胞數量盡量相(xiàng)同，使細胞均勻分布。 3）由于自(zì)身特性問題，懸浮細胞相(xiàng)對較難轉染，需要優化條件(jiàn)以提高(gāo)轉染效率，如遇細胞特殊，可更換為(wèi)電(diàn)轉方式。
2.2 轉染步驟 對于每個(gè)轉染樣品，請按以下(xià)步驟準備： a. 稀釋 siRNA：用 30μl 1×CPFect Transfection Buffer（v2）稀釋 1.25μl 20μM siRNA 儲存液（v3），輕輕混勻，室溫孵育 5min。 b. 混合液制備：加入 3μl CPFect siRNA/miRNA Transfection Reagent（v4），輕輕吹打混勻，室溫孵育 0～15min，制備成轉染複合物(wù)。 【注意】： 1）請不要振蕩，溶液可能(néng)會(huì)有渾濁，但不會(huì)影響轉染； 2）混合液可室溫放(fàng)置一(yī)段時間，但不宜超過 24h。 c. 将 CPFect轉染複合物(wù)加入到(dào)适量無雙抗完全培養基（v1）中，輕輕混勻。 【注意】：CPFect轉染複合物(wù)加入原細胞培養基中一(yī)般無需移除或更換。但也可依具體實驗情況進行優化。 d. （可選）進行其他必要的特殊處理（如加藥處理） ； e. 将培養闆置于 37℃、CO2培養箱中培養24~96h（培養時間與實驗目的相(xiàng)關）。
2.3 效果檢測 轉染完成後 24~72小(xiǎo)時均可進行siRNA沉默效果檢測，最佳檢測時間與細胞類型，轉染試劑，檢測目的等相(xiàng)關。 1）RNA水(shuǐ)平的檢測（RNAi沉默鑒定标準）：siRNA作用的目标分子是目的基因的RNA，在RISC系統的作用下(xià)剪切目标RNA，故檢測目的基因的RNA水(shuǐ)平可直接反應siRNA是否發揮相(xiàng)應作用，且通(tōng)過qRT-PCR可計算(suàn)具體的抑制效率。一(yī)般siRNA轉染後 24~72h即可檢測到(dào)目的基因RNA表達明顯降低(dī)。 【注意】：引物(wù)設計質量很重要，需要确保檢測引物(wù)有效性。 2）蛋白(bái)水(shuǐ)平的檢測：對于蛋白(bái)編碼基因，還(hái)需檢測相(xiàng)應的蛋白(bái)表達水(shuǐ)平，以确定是否目的蛋白(bái)也成功下(xià)調。由于蛋白(bái)表達水(shuǐ)平的變化受多(duō)個(gè)因素影響，有時候會(huì)出現RNA水(shuǐ)平成功抑制了而蛋白(bái)水(shuǐ)平變化不明顯的情況。若蛋白(bái)表達水(shuǐ)平下(xià)降不明顯，需認真檢測其mRNA的表達水(shuǐ)平，用來判斷RNAi不理想的原因。 3）功能(néng)篩選：應用 BrdU或EdU細胞增殖，細胞凋亡等方法進行siRNA對細胞功能(néng)的直接篩選。
轉染體系的調整參考用表 表I. 不同細胞培養容器(qì)轉染時培養基、核酸及轉染試劑用量
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
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